THUNDER Imager活細胞成像系統(tǒng)應(yīng)用紀要：健康卵母細胞發(fā)育
背景：研究卵母細胞發(fā)育
模式生物黑腹果蠅在遺傳學(xué)和發(fā)育生物學(xué)中用于研究遺傳的基本機制。發(fā)育生物學(xué)研究的一項重點工作是鑒定和表征對生殖健康至關(guān)重要的基因，包括減數(shù)分裂過程中的染色體分離以及其他有助生成健康卵母細胞的過程[1-3]。
減數(shù)分裂同源物之間的聯(lián)會復(fù)合物（SC）或聯(lián)會的形成對于交換和染色體分離至關(guān)重要[3]。人們對SC組裝如何啟動所知甚少，僅知道可能在確保同源物之間的聯(lián)會以及控制雙鏈分離和交叉形成方面起到關(guān)鍵作用。對果蠅聯(lián)會的遺傳要求的研究表明，有3個時間上和遺傳上不同的聯(lián)會啟動階段。這些是僅在著絲粒處觀察到聯(lián)會的早期偶線期卵母細胞、SC在幾個常染色位點啟動的中期偶線期卵母細胞，以及SC在更多依賴于Kleisin樣蛋白C(2)M的位點啟動的晚期偶線期卵母細胞[3]。
研究卵母細胞的挑戰(zhàn)
由于光散射產(chǎn)生的霧面或離焦模糊，較厚的標本（例如卵母細胞）難以使用寬場熒光顯微鏡成像。位于標本深處的待觀察結(jié)構(gòu)可能會被霧面遮擋。
所用方法
對卵巢中位于早期階段的黑腹果蠅卵母細胞進行成像。DNA被標記為青色，卵母細胞表達綠色熒光蛋白，著絲粒被抗CENP-A抗體免疫標記并顯示為白色，而C(2)M凝聚蛋白標記為洋紅色。使用配備63倍1.4數(shù)值孔徑（NA）物鏡的THUNDER Imager活細胞成像系統(tǒng)對卵巢進行大約13μm深度的成像。獲取最大亮度投影并采用Instant Computational Clearing（ICC）。
所獲結(jié)果
圖1所示為使用THUNDER Imager活細胞成像系統(tǒng)采集的卵母細胞圖像。
圖1：經(jīng)ICC處理的早期階段果蠅卵巢的最大亮度投影圖像，青色表示DNA，綠色表示卵母細胞，白色表示著絲粒，品紅色代表凝聚蛋白。圖片來自美國新澤西州皮斯卡塔韋羅格斯大學(xué)瓦克斯曼微生物研究所INSPIRE博士后研究員Jessica Fellmeth博士。
此處顯示的結(jié)果表明，使用THUNDER Imager活細胞成像系統(tǒng)對卵母細胞進行成像，其揭示的豐富細節(jié)有助于研究有關(guān)健康卵母細胞生成和發(fā)育機制。
相關(guān)產(chǎn)品
References：
1.J.K. Jang, A.C. Gladstein, A. Das, J.G. Shapiro, Z.L. Sisco, K.S. McKim, Multiple pools of PP2A regulate spindle assembly, kinetochore attachments and cohesion in Drosophila oocytes. J. Cell Sci. (2021) vol. 134, iss. 14, jcs254037, DOI: 10.1242/jcs.254037.
2.J.E. Fellmeth, K.S. McKim, Meiotic CENP-C is a shepherd: bridging the space between the centromere and the kinetochore in time and space, Essays Biochem. (2020) vol. 64, iss. 2, pp. 251–261, DOI: 10.1042/EBC20190080.
3.N.S. Tanneti, K. Landy, E.F. Joyce, K.S. McKim, A Pathway for Synapsis Initiation during Zygotene in Drosophila Oocytes, Current Biology (2011) vol. 21, iss. 21, pp. 1852–1857, DOI: 10.1016/j.cub.2011.10.005.
4.J. Schumacher, L. Bertrand, THUNDER Technology Note: THUNDER Imagers: How Do They Really Work? Science Lab (2019) Leica Microsystems.
5.L. Felts, V. Kohli, J.M. Marr, J. Schumacher, O. Schlicker, An Introduction to Computational Clearing: A New Method to Remove Out-of-Focus Blur, Science Lab (2020) Leica Microsystems.
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