外周血干細(xì)胞（PBSCs）廣泛用于自體造血干細(xì)胞移植（ABSCT）。這些細(xì)胞會(huì)儲(chǔ)存數(shù)月甚至數(shù)年，通常是在低溫下≤−140°C，直到使用。雖然，有研究報(bào)告對長期儲(chǔ)存后的PBSCs的CD34+活性和克隆形成試驗(yàn)進(jìn)行了幾項(xiàng)體外研究，但只有少數(shù)考慮了長期儲(chǔ)存對體內(nèi)造血系統(tǒng)恢復(fù)的影響。

在2017年，來自德國海德堡大學(xué)的課題組通過對105例多發(fā)性骨髓瘤患者的移植手術(shù)，分析了外周血干細(xì)胞經(jīng)過長期存儲(chǔ)對移植效果的影響。研究對象：外周血干細(xì)胞，都經(jīng)過了完整的凍融工作流程處理：采集、離心、程序降溫儀（CRF）、添加10%DMSO保護(hù)液等、氣相液氮存儲(chǔ)、低溫運(yùn)輸和專用設(shè)備融解。處理后的PBSCs最終產(chǎn)品被存儲(chǔ)在血袋中（NC concentration of ≤5 × 10⁸/mL and atotal volume of 100 mL per bag）。

備注：PBSCswere processed and stored in accordance with the German Medical Council andresponsible scientific society’s guidelines [26-28].

實(shí)驗(yàn)對象選擇了在2003年至2015年之間接受過HDmelphalan化療及ABSCT的患者。第一個(gè)療程中包括了HD化療和ABSCT處理。如果對于那些沒有完全恢復(fù)或接近完全恢復(fù)的病例，在第二次或第三次移植時(shí)，患者只接受CD34細(xì)胞。

根據(jù)PBSC存儲(chǔ)周期（列2-4）， ABSCs的變化，研究人員分析了247個(gè)ABSCT全療程病例，table 2概述了在實(shí)施ABSCT方案時(shí)，不同患者在每次治療或者急救中所使用的細(xì)胞儲(chǔ)存時(shí)長的分布情況。

儲(chǔ)存時(shí)間小于12個(gè)月的細(xì)胞被優(yōu)先用于第一個(gè)或者第二個(gè)療程，只有第二，第三次的急救治療才用儲(chǔ)存時(shí)間>12 并≤60 個(gè)月 (n = 75) 和 >60個(gè)月的細(xì)胞 (n = 29)。正如預(yù)期的一樣，由于PBSC儲(chǔ)存時(shí)間的增加，進(jìn)行ABSCT時(shí)的年齡也逐漸增加。且各組間移植的CD34+細(xì)胞數(shù)量（P=0.86），無顯著性差異。
造血細(xì)胞重建率受PBSC的儲(chǔ)存時(shí)間影響

表4：經(jīng)過化療和移植之后，造血細(xì)胞的恢復(fù)情況

實(shí)驗(yàn)人員將所有ABSCT分為了A，B，C三組。A組為小于12個(gè)月儲(chǔ)存時(shí)長的細(xì)胞。B組為大于12個(gè)月且小于60個(gè)月的細(xì)胞。C組為大于60個(gè)月的細(xì)胞。儲(chǔ)存時(shí)長對白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞恢復(fù)沒有影響。正相反，接受保存≤12個(gè)月的PBSCs的患者與收到存儲(chǔ)>12個(gè)月且≤60個(gè)月的患者相比顯示出較慢的白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的恢復(fù)。存儲(chǔ)組間，移植的CD34+數(shù)量和到達(dá)白細(xì)胞移植的時(shí)間不相關(guān)。中性粒細(xì)胞移植的時(shí)間與移植的CD34+細(xì)胞數(shù)量不相關(guān)。

Kaplan-Meier分析和對數(shù)秩檢驗(yàn)確定時(shí)間曲線，比較并分析白細(xì)胞，中性粒細(xì)胞和血小板恢復(fù)情況時(shí)，得到了相似的結(jié)論： 

>12個(gè)月且≤60個(gè)月的細(xì)胞依然恢復(fù)的更快。各組間的血小板恢復(fù)沒有顯著差異。在C，D組之間的血小板恢復(fù)沒有顯著差異。

≤12個(gè)月及>12個(gè)月及≤60個(gè)月的PBSC兩存儲(chǔ)組，中性粒細(xì)胞恢復(fù)的時(shí)間差距在亞組的第二次ABSCT中得到證明。這排除了之前的ABSCT的混淆效應(yīng)。在所有亞組中，沒有發(fā)現(xiàn)再生障礙，血小板和白細(xì)胞與PBSC儲(chǔ)存時(shí)間有任何關(guān)系。為了證實(shí)該結(jié)論，還針對D組增加了一個(gè)數(shù)據(jù)分析：3次ABSCT移植后患者的術(shù)后效果比較；并再次發(fā)現(xiàn)血液重組和儲(chǔ)存時(shí)間無顯著差異。

  本次研究在很多方面都與之前的文獻(xiàn)有一致結(jié)論。

• 接受中期或長期存儲(chǔ)時(shí)長PBSC移植的患者，中性粒細(xì)胞恢復(fù)時(shí)間更短。

• 血小板恢復(fù)速度，在3個(gè)儲(chǔ)存組之間沒有顯著差異。

• 各存儲(chǔ)組之間對白細(xì)胞和血小板植入的時(shí)間沒有差異。
  本次與預(yù)期不一致的結(jié)論

本次研究中，患者接受了≤12個(gè)月儲(chǔ)存的PBSCs與那些儲(chǔ)存了一段時(shí)間的PBSC相比，白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞恢復(fù)延遲1天。這表明在第2，3次ABSCT時(shí)，白細(xì)胞計(jì)數(shù)會(huì)更快到達(dá)<1.0× 10⁹/L。這是在其它研究中沒有出現(xiàn)的現(xiàn)象，當(dāng)然這些數(shù)據(jù)是否可靠可能還需要在以后的研究中確認(rèn)。

之前，長期儲(chǔ)存細(xì)胞的方法是儲(chǔ)存在≤-180℃的液態(tài)或氣態(tài)氮中，這是為數(shù)不多的、去探究≤-140℃溫度下細(xì)胞產(chǎn)品對治療效果影響的課題。同樣，有很多科研機(jī)構(gòu)都研究過CD34+長期儲(chǔ)存后的活力，并且表明了PBSC經(jīng)過長達(dá)14年的低溫儲(chǔ)存仍能保持活力并進(jìn)行安全的移植治療。

然而，據(jù)我們所知，很少有團(tuán)隊(duì)調(diào)查長期儲(chǔ)存的細(xì)胞在HD化療和ABSCT后對造血功能恢復(fù)的影響。本次共分析了147個(gè)使用中期或長期PBSC的ABSCT手術(shù)案例。這與之前的研究相比，案列數(shù)量明顯更多。此外，分析是按照移植的先后順序進(jìn)行的：第一次ABSCT，第二次ABSCT，第三次ABSCT，這是典型的MM患者的治療計(jì)劃。這種方式允許團(tuán)隊(duì)進(jìn)行亞組分析（第二次/第三次ABSCT），以確定在移植長期儲(chǔ)存PBSC的情況下，移植的先后順序?qū)υ煅�功能恢�?fù)效果的可能影響。

本次研究的結(jié)論中，側(cè)面強(qiáng)調(diào)了嚴(yán)格執(zhí)行手冊標(biāo)準(zhǔn)中每一個(gè)工作流程、使用質(zhì)量穩(wěn)定的設(shè)備以及耗材是必要的；德國BV50/BV45程序降溫儀（包括Smartline）、法國液空氣相液氮罐（Arpege170 和RCB1000）是該實(shí)驗(yàn)室長期使用的凍存設(shè)備，這為臨床樣本庫選擇合適的設(shè)備提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。

    上述內(nèi)容來源于Storage Duration of Autologous StemCell Preparations Has No Impact on Hematopoietic Recovery after Transplantation（Katharina Lisenko等）  Biologyof Blood and Marrow Transplantationt 23 (2017) 684–690

BV45程序降溫儀用于細(xì)胞在進(jìn)入液氮溫度前的降溫處理以及復(fù)蘇；使用標(biāo)準(zhǔn)化的三溫度傳感器并經(jīng)過嚴(yán)格的校準(zhǔn)，保證溫度的真實(shí)性。實(shí)現(xiàn)溫度曲線，腔內(nèi)溫度，樣品溫度，以不同的顏色顯示在監(jiān)控器。

同時(shí)，該型號(hào)具備監(jiān)控自增壓供給罐的液氮供給壓力的功能，這項(xiàng)新的技術(shù)保障了設(shè)備在降溫過程中穩(wěn)定性。

開門方式為頂蓋開門，具有自動(dòng)和手動(dòng)植冰功能。當(dāng)達(dá)到冰點(diǎn)時(shí)，自動(dòng)植冰開始（第二控制閥），從而避免對樣品有害的再結(jié)晶階段。集成的TCA可實(shí)現(xiàn)凍結(jié)過程的可持續(xù)優(yōu)化通過終點(diǎn)（樣品）溫度傳感器進(jìn)行監(jiān)測。

軟件具備預(yù)裝成熟的程序：紅十字會(huì)（歐洲）已成熟應(yīng)用的用于淋巴細(xì)胞（血袋或凍存管），解融程序也可以使用。

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