前言
一提起福爾馬林( formalin)，很多人都會想起開始學人體解剖學時那種刺鼻辣眼的氣味，可以想象注射福爾馬林造成的不適，這種刺激與前面提到的熱灼刺激不同，它是一種化學刺激，并且持續(xù)時間也較長，是一種慢性持續(xù)性疼痛模型的代表。Dubuisson和Dennis (1977)把福爾馬林試驗的行為反應分為4級：O級：注射福爾馬林的腳爪仍可壓在地板上并承受其體重；1級：動物把較輕的身體部分放在注射的腳爪上，并輕輕地壓在地板上；2級：動物把注射的腳爪抬離地面；3級：動物舔，咬或者搖晃注射過福爾馬林的腳爪。

福爾馬林注射可以引起兩期的疼痛感覺，這兩個期的區(qū)分除了時間上（第一期為注射后立即的疼痛持續(xù)到lOmin左右，第二期的疼痛則從注射后大約15 - 20min開始，持續(xù)60min以上），藥理學上也有明顯的不同，即非類固醇抗炎藥(nonstexoidal anti-inflammatory agents，NSAIDs)對第一期疼痛無效但可減弱第二期的疼痛，因而也說明福爾馬林性第二期疼痛是一種周圍炎癥性疼痛。這種疼痛一般認為與中樞敏化作用有關，研究這類疼痛對于臨床上組織損傷造成的痛覺過敏機制探討極力重要。
 

一、實驗材料

1、實驗動物健康成年雄性小鼠(25 - 30g)或大鼠(250g)，分組飼養(yǎng)。

2、實驗藥物生理鹽水（對照）和實驗藥物。

3、5%福爾馬林（可用Signa的10%福爾馬林緩沖溶液，按I:l稀釋，這里lO%的溶液里含4%

的甲醛，因此，5%福爾馬林溶液就是2%的甲醛溶液）。

4、帶28.5G針頭的0.5ml（大鼠用）或30C針頭的50FLI（小鼠用）微量(Hamilton)注射器；帶27G（大鼠）或26C（小鼠）針頭的1.0ml注射器。

5、清潔的單個動物分裝盒（如帶蓋的鞋盒）。

6、手持計數(shù)器（一只動物一個），鐘表或計時器。

7、鏡子若干。

8、電子控制的定時亮光裝置。

二、實驗步驟

1、從動物房取出實驗動物，稱重后，用不退色標記筆標記要注射福爾馬林或生理鹽水的后爪，注意標記腳爪的前后面，將對照組與實驗組分開。

2、將動物放人試驗時用的清潔的容器盒（鞋盒）內，把鏡子放到容器盒的后面及側面，確保實驗者能從不同的角度看到標記的腳爪。讓動物適應15 - 30min。

3、福爾馬林準備大鼠實驗用28.5G針頭的0.5ml注射器抽取5%福爾馬林50vl;小鼠實驗用30G針頭的50FLl微量注射器抽取5%福爾馬林20L。

4、藥物注射用27G（大鼠）或26C（小鼠）的1.0ml注射器注射對照溶液或實驗藥物，注射后給出至少10min時間，讓藥物在體內作用后才可進行下一步疼痛測試。不同的藥物可能需要不同的作用時間，也可在注射福爾馬林后注射，這主要用于研究第二期疼痛反應。

5、福爾馬林注射將動物從容器盒中取出放到桌上，用一只手輕輕抓住動物的身體軀干，另一手抓住尾巴，讓動物“坐”在桌上便于拉伸其后爪。把尾巴放到抓身體的手中，空出手來把標記的腳爪拉出來，然后拿取裝有福爾馬林的微注射器。大鼠注射可以將溶液注射到腳拇指背上踝下方的皮下即可；而小鼠注射則要將福爾馬林溶液注射到腳底爪的中央皮。

6、注射福爾馬林后，立即將動物放回到容器內并開始計時，這是疼痛的第一期反應時間。其余的動物也依次類似進行注射，然后開始分別計時。

7、一般在福爾馬林注射后最初的反應在大小鼠是不一樣的，即大鼠出現(xiàn)的是爪趾的抽縮( flich-ing)，而小鼠則主要是舔注射的部位，因此，必須觀察第一只注射大鼠后爪在15。內抽縮的次數(shù)，然后依次記錄其他3只大鼠的抽縮次數(shù)；完成第4只后又從第1只大鼠開始，這樣循環(huán)計算共10min。小鼠的觀察是每隔5min觀察Imin，然后隔1min注射下一只小鼠，因而可以注射4只小鼠，這樣每間隔5min觀察1只小鼠，共計40min，小鼠的觀察主要計算其舔腳爪的時間。

8、記錄疼痛第一期內大鼠總的后抓抽縮次數(shù)或小鼠的舔腳趾的總時間。為了有效利用時間，可以在第一期于第二期之間準備下一組動物的稱重，標記及適應等。

9、大鼠福爾馬林注射后30min即可開始計算第二期的抽縮次數(shù)，一般計算20min；小鼠注射后10- 40min可以算第二期開始，也同第一期一樣計算其舔爪趾的總時間。

10、重復上述步驟，在所有實驗動物完成測試后（一般每組至少8個數(shù)據(jù)），分組將其結果平均并作統(tǒng)計學處理。

三、注意事項

1、為了減少抓取動物的壓抑( stress)行為，可以在實驗前一到兩天開始訓練抓取動物，這樣在注射福爾馬林時就可避免壓抑造成的實驗結果的波動。

2、試驗動物太小(如< 200g)、福爾馬林注射不當或檢測方法不對都可造成實驗結果的偏差，因此，應選大動物、標準注射程序和有效的檢驗方法。

3、福爾馬林疼痛的第二期可能變異較大，預實驗階段可以計算第二期的整個階段(從注射后第20 - 60min)，這樣知道在大概時間段內反應的高峰期后即可有選擇地對其他動物進行重點時間段計算。

4、福爾馬林的濃度一般定為5%，但是有些藥物（知嗎啡2mg/kg）可能因這種濃度的刺激太強而沒有作用，但是這個藥物的劑量足以完全消除1%福爾馬林的反應，因而為了測試不同藥物對疼痛反應的影響，必須用不同濃度的福爾馬林注射到腳爪上。