【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：糖類抗原72-4（CA72-4）測定試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：TM-CA72-4 ELISA
【產(chǎn)品規(guī)格】
96人份/盒
【預(yù)期用途】
該試劑盒用于在人體血清或血漿中定量檢測腫瘤相關(guān)抗原CA72-4。
【前言簡介】
CA72-4(癌抗原72-4)最初被描述為由B72.3識(shí)別的抗原因子。B72.3是由相應(yīng)的原發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移后的膜萃取物免疫雜交生產(chǎn)的鼠單克隆抗體。CA72-4被證實(shí)是1MDa的粘液樣糖蛋白，合成物稱為TAG72（腫瘤相關(guān)抗原72）。TAG72蛋白的分子量為48KD. 血清和血漿中的CA72-4的水平升高見于某些惡性疾病，包括胰、胃、膽、結(jié)腸、乳腺、卵巢、子宮頸、子宮內(nèi)膜的腫瘤。它對胃腸道和卵巢的腫瘤有很高的診斷學(xué)的敏感性。盡管在一些良性的疾病如風(fēng)濕病和卵巢囊腫也發(fā)現(xiàn)有CA72-4的升高，但是臨床研究表明，對于胃腸道和卵巢腫瘤，特異性診斷高達(dá)95％。CA72-4的水平和腫瘤的大小及分級緊密關(guān)聯(lián)。CA72-4是胃腸道腫瘤的病人選擇治療學(xué)的監(jiān)測和隨后的護(hù)理的指標(biāo)。另外合適的指標(biāo)是CA199和CEA，另外，CA72-4是卵巢腫瘤的病人選擇治療學(xué)的監(jiān)測和隨后的護(hù)理的可靠性指標(biāo)，尤其是對于CA125陰性的病人。
【檢測原理】
DRG公司的TM-CA 72-4酶免實(shí)驗(yàn)是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。反應(yīng)板上的微檢測孔包被有能結(jié)合CA72-4分子上獨(dú)特抗原位點(diǎn)的單克隆小鼠抗體。一份含有內(nèi)源性CA72-4的病人樣本在包被孔中與酶聯(lián)物進(jìn)行孵育，該酶聯(lián)物是一種聯(lián)結(jié)有辣根過氧化物酶的抗CA72-4抗體。孵育后，用洗滌液洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物。結(jié)合上的辣根過氧化物酶的總量與樣本中CA72-4的濃度成正相關(guān)。加入底物溶液后，顯出的顏色強(qiáng)度與病人樣品中CA72-4的濃度成正比。
【主要組成成分】

1. 微孔板：     12×8孔，可拆，微孔中包被抗CA72-4 單克隆抗體。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（0-4）：5支 0.5ml，即用型，濃度為0，3，20，50，100U/ml，內(nèi)含無水銀防腐劑。
3. 高低質(zhì)控：    2支 凍干粉，0.5ml，見“試劑準(zhǔn)備”，質(zhì)控品的濃度及范圍請見試劑瓶標(biāo)簽或質(zhì)控單。內(nèi)含無水銀防腐劑。
4. 樣品稀釋液：  1支，3ml，即用型，內(nèi)含無水銀防腐劑。
5. 酶聯(lián)物：      1支 1.4ml，10倍濃縮，標(biāo)記辣根過氧化物酶的抗CA72-4抗體，內(nèi)含無汞防腐劑。
6. 酶聯(lián)物稀釋液：1支，14ml，即用型型，含無汞防腐劑。
7. 底物液：      1支，14ml，即用型。
8. 終止液：      1支，14ml，即用型，含0.5M的硫酸，避免接觸終止液，以免刺激或著燒皮膚。
9. 洗滌液（40X）：1支，30ml。

注意：用于樣品稀釋的樣品稀釋液應(yīng)視需要而定。
實(shí)驗(yàn)需要器材（但試劑盒不提供）

1. 酶標(biāo)儀(450±10nm)。
2. 移液器
3. 吸水紙
4. 蒸餾水
5. 計(jì)時(shí)器
6. 坐標(biāo)紙或是數(shù)據(jù)處理軟件

檢測步驟
每次實(shí)驗(yàn)都應(yīng)含有一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1. 將實(shí)驗(yàn)所需數(shù)目的板條固定在板架上。
2. 用一次性吸嘴將20µL的標(biāo)準(zhǔn)品﹑質(zhì)控品和樣品加入相應(yīng)的檢測孔中。
3. 每孔加入100µL的新鮮配制的酶聯(lián)物。徹底混合十秒，在此步驟里，充分搖勻十分重要。
4. 在室溫下溫育120分鐘。
5. 快速棄去檢測孔中的內(nèi)含物，每孔用400µL洗滌液洗板五次，在吸水紙上用力拍板以除去殘留的液體。注意：洗板步驟是否正確將直接影響到實(shí)驗(yàn)的靈敏度和精確性。
6. 每孔加入100µL的底物液。
7. 在室溫下溫育30分鐘。
8. 每孔加入100µL的終止液終止反應(yīng)。
9. 在加終止液后十分鐘內(nèi)，室溫下，于450±10nm處讀取吸光率。

【結(jié)果計(jì)算】

1. 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品﹑質(zhì)控品和病人樣品的平均吸光率。
2. 以吸光率為Y軸，濃度為X軸，按照從標(biāo)準(zhǔn)品中獲得的平均吸光率和其相對應(yīng)的濃度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3. 利用樣品的平均吸光率，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出其相應(yīng)的濃度值。
4. 自動(dòng)方法：使用立方函數(shù)﹑四參數(shù)模式或雙對數(shù)的計(jì)算機(jī)程序可得到結(jié)果。
5. 樣品的濃度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接獲取。樣品的濃度高于最高標(biāo)準(zhǔn)品的濃度則需進(jìn)一步稀釋。在計(jì)算樣品的濃度的時(shí)候，要乘以稀釋倍數(shù)。

下面是CA72-4 ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線的典型例子。

標(biāo)準(zhǔn)品	吸光率（450nm）
零標(biāo)準(zhǔn)品（0 U/ml）	0.08
標(biāo)準(zhǔn)品1（3 U/ml）	0.19
標(biāo)準(zhǔn)品2（20 U/ml）	0.59
標(biāo)準(zhǔn)品3（50 U/ml）	1.16
標(biāo)準(zhǔn)品4（100 U/ml）	2.02

【期望值】
每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須建立自己的正常值。
以下是利用DRG公司的糖類抗原72-4（CA72-4）測定試劑盒（酶聯(lián)免疫法）EIA-5071對正常成年人測試所得到的結(jié)果：

測試人群	有效例數(shù)	中間值	平均值	5th-95th
健康人群	89	2.0 U/mL	2.3 U/mL	0 U/mL-6.5 U/mL

【注意事項(xiàng)】

1. 在使用前所有試劑和樣品均需平衡至室溫，所有試劑要充分混合但不要起泡。
2. 一旦實(shí)驗(yàn)開始，所有步驟都必須進(jìn)行到底而不能中斷。
3. 對每種試劑﹑標(biāo)準(zhǔn)品和樣品使用一次性的吸嘴，以避免交叉污染。
4. 吸光率決定于溫育時(shí)間和溫度，在開始實(shí)驗(yàn)前，建議準(zhǔn)備好所有的試劑，將需要檢測的微孔板固定在板架上，這些步驟保證每次加液步驟所需時(shí)間相同而沒有中斷。
5. 按照一般的規(guī)律，酶反應(yīng)時(shí)間與溫育時(shí)間和溫度成線性比例。

 
【生產(chǎn)企業(yè)】
德國 DRG Instruments GmbH
 
【國內(nèi)售后單位】
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