RPA(恒溫擴增)技術(shù)應(yīng)用于腫瘤基因檢測
瀏覽次數(shù):1187 發(fā)布日期:2024-5-16
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腫瘤基因相關(guān)基因檢測在癌癥早期診斷中意義重大。目前的檢測金標準為PCR和基因測序技術(shù),而這些技術(shù)大多需要精密的儀器和復(fù)雜的試驗流程,專業(yè)的實驗人員配置。在現(xiàn)有的分子診斷技術(shù)中,以RPA為代表的核酸等溫擴增技術(shù)以其快速,靈敏,無需儀器等特點,使突破以上壁壘成為可能。
近日,大連醫(yī)科大學(xué)劉元斌課題組發(fā)明一種無需任何儀器,實現(xiàn)快速檢測突變基因并肉眼識別的新方法,被稱為AS-RPA-PNA-SYBR (ARPS) system。該方法以RPA(重組酶聚合酶恒溫擴增技術(shù))為基礎(chǔ),加之PNA技術(shù)(肽核酸類似物),并利用SYBR Green I核酸染料法顯色,肉眼即可判斷核酸擴增與否。
文章中,作者比較了在PCR,測序以及ARSP在非小細胞肺癌中EGFR突變檢測應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)在非小細胞肺癌細胞系中,5分鐘便能檢測到EGFR 19Del(2)缺失突變,10分鐘檢測EGFRL SNP 突變,實現(xiàn)肉眼快速判斷(圖1),并在組織樣本中同樣得到驗證(圖2)。
同樣,10到20分鐘之內(nèi)成功檢測到EGFR點突變。與傳統(tǒng)的DNA測序方法相比較,ARPS有著許多優(yōu)勢之處,包括時間短,成本低,操作簡單,無需精密儀器等,而且,在基因組DNA樣本中,ARPS可以檢測到30%和40%的靶向突變位點,靈敏度與測序相當(圖3)。之前有文章報道稱,RPA技術(shù)與末端熒光檢測和膠體金側(cè)流試紙條以及微流控芯片結(jié)合檢測EGFR突變,但還沒有類似ARSP肉眼觀測法的應(yīng)用。
然而,ARSP法同樣有待于進一步優(yōu)化。比如,對于每一次EGFR檢測來說,檢測靈敏性和特異性都還有待提高;由于樣本量有限,現(xiàn)仍需更多的臨床樣本實驗進行驗證。無論如何,在精準醫(yī)療大背景下,對于一些沒有條件購買測序儀,以及不具備專業(yè)操作能力的不發(fā)達地區(qū)和國家,這種快速簡便,操作簡單的,無需任何儀器的ARSP基因檢測法無疑為癌癥基因檢測提供有效參考,同時也為分子即時診斷領(lǐng)域(POCT)提供新的潛在解決方案。
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