我們百奧賽圖也為大家送來(lái)了“年貨”- TLR9人源化小鼠（B-hTLR9 mice），一起來(lái)看看吧~

B-hTLR9小鼠基本信息

 

TLR9（Toll-like receptor 9） 是由TLR9基因編碼的一種蛋白質(zhì)，也稱為CD289（分化抗原決定簇289），是Toll樣受體家族的一員。TLR9是表達(dá)于免疫系統(tǒng)細(xì)胞如樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和其他抗原提呈細(xì)胞內(nèi)的重要受體。TLR9優(yōu)先結(jié)合存在于細(xì)菌和病毒中的DNA，通常被DNA分子中未甲基化的CpG序列激活，從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)移動(dòng)到高爾基體和溶酶體，并與MyD88相互作用，從而觸發(fā)導(dǎo)致促炎細(xì)胞因子反應(yīng)的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，主要是誘導(dǎo)I型干擾素、IL-6、TNF、IFN-α和IL-12的產(chǎn)生^[1]。癌癥、感染和組織損傷都可以調(diào)節(jié)TLR9的表達(dá)和激活。TLR9也是自身免疫性疾病的一個(gè)重要因子，目前正在積極研發(fā)TLR9的激動(dòng)劑和拮抗劑，助力于調(diào)節(jié)自身免疫性炎癥。

      TLR9已被確認(rèn)為系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和結(jié)節(jié)性紅斑麻風(fēng)病（ENL）的主要參與分子。TLR9的缺失加劇了SLE的進(jìn)展，并導(dǎo)致樹(shù)突狀細(xì)胞的活化增加，使IgA和IFN-α的水平升高。在ENL患者單核細(xì)胞上TLR9高水平表達(dá)，并促進(jìn)TNF、IL-6和IL-1β的分泌。自身免疫疾病也可以由活化細(xì)胞進(jìn)行凋亡并被抗原呈遞細(xì)胞吞噬來(lái)觸發(fā)。細(xì)胞的激活導(dǎo)致脫甲基化，從而暴露出宿主DNA的CpG區(qū)，從而通過(guò)TLR9來(lái)激活炎癥反應(yīng)^[2,3]。因此，TLR9激動(dòng)劑和拮抗劑可能在多種炎癥疾病的治療中起到一定作用，目前該領(lǐng)域的研究也是非�；钴S的。

      TLR9的表達(dá)會(huì)隨著癌癥類型不同有很大差異，乳腺癌和腎細(xì)胞癌中TLR9呈低水平表達(dá)，而卵巢癌、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤等患者中TLR9呈高水平表達(dá)，目前尚不清楚癌癥是誘導(dǎo)TLR9表達(dá)上調(diào)，還是TLR9的高表達(dá)加速癌癥的發(fā)生，增加腫瘤細(xì)胞侵襲和增殖的能力^[4]。

             
  靶向TLR9信號(hào)的基于CpG的寡核苷酸也被作為潛在的抗癌藥物，它們模擬了TLR9的天然配體——未甲基化的細(xì)菌DNA。刺激TLR9信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸（IMOs）也在火熱研發(fā)中，IMO-2055作為單一療法在小鼠模型中具有抗腫瘤活性，與化療藥物聯(lián)用時(shí)抗腫瘤效應(yīng)增強(qiáng)^[5,6]。在I期臨床試驗(yàn)中，評(píng)價(jià)了IMO-2055單獨(dú)使用以及與化療藥物吉西他濱或伊立替康聯(lián)合使用的安全性和免疫活性，聯(lián)用時(shí)IMO呈現(xiàn)更好的效果。目前IMO-2055正在進(jìn)行兩項(xiàng)Ib臨床試驗(yàn)中，一項(xiàng)是在非小細(xì)胞肺癌患者中聯(lián)合使用貝伐珠單抗和厄洛替尼，另一項(xiàng)是在結(jié)腸癌患者中聯(lián)合使用利妥昔單抗和伊立替康^[7]。MGN-1703和MGN-1706是由非編碼DNA組成的雙莖環(huán)免疫調(diào)節(jié)佐劑，正在開(kāi)發(fā)成為T(mén)LR9激動(dòng)劑，這些化合物在臨床前模型中單獨(dú)使用均有抗癌作用^[8]，MGN-1703在治療前列腺癌和結(jié)直腸癌的I期臨床試驗(yàn)中獲得了積極結(jié)果。

TLRs信號(hào)通路

圖1 TLRs信號(hào)通路^[1]

 

B-hTLR9小鼠蛋白表達(dá)分析

圖2 通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)野生型C57BL/6和B-hTLR9雜合鼠中TLR9蛋白表達(dá)進(jìn)行分析。

收集野生型C57BL/6和B-hTLR9雜合鼠的脾細(xì)胞，并用種屬特異性抗TLR9抗體進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。

結(jié)果顯示：在C57BL/6和B-hTLR9雜合鼠的B細(xì)胞表面檢測(cè)到mTLR9，在B-hTLR9雜合鼠的B細(xì)胞表面檢測(cè)到hTLR9。

圖3 通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)野生型C57BL/6和B-hTLR9雜合鼠中TLR9蛋白表達(dá)進(jìn)行分析。

收集野生型C57BL/6和B-hTLR9雜合鼠的脾細(xì)胞，并用種屬特異性抗TLR9抗體進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。

結(jié)果顯示：在C57BL/6和B-hTLR9雜合鼠的DC細(xì)胞表面檢測(cè)到mTLR9，在B-hTLR9雜合鼠的DC細(xì)胞表面檢測(cè)到hTLR9。

圖4 通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)野生型C57BL/6和B-hTLR9雜合鼠中TLR9蛋白表達(dá)進(jìn)行分析。

收集野生型C57BL/6和B-hTLR9雜合鼠的脾細(xì)胞，并用種屬特異性抗TLR9抗體進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。

結(jié)果顯示：在C57BL/6和B-hTLR9雜合鼠的巨噬細(xì)胞表面檢測(cè)到mTLR9，在B-hTLR9雜合鼠的巨噬細(xì)胞表面檢測(cè)到hTLR9。

今天的年貨就到這里啦，小伙伴們記得掃碼關(guān)注我們的微信公眾號(hào)哦，更多“年貨”任你挑。

 

參考文獻(xiàn)：
[1] Iwasaki, A. & Medzhitov, R. Toll-like receptor control of the adaptive immune responses. Nature Immunol. 5, 987–995 (2004).
[2] Dias AA, Silva CO, Santos JP, Batista-Silva LR, Acosta CC, Fontes AN, Pinheiro RO, Lara FA, Machado AM, Nery JA, Sarno EN, Pereira GM, Pessolani MC (September 2016). DNA Sensing via TLR-9 Constitutes a Major Innate Immunity Pathway Activated during Erythema Nodosum Leprosum.J Immunol. 197 (5): 1905–13.
[3] Christensen SR, Shupe J, Nickerson K, Kashgarian M, Flavell RA,Shlomchik MJ (September 2006). Toll-like receptor 7 and TLR9 dictate autoantibody specificity and have opposing inflammatory and regulatory roles in a murine model of lupus. Immunity. 25 (3): 417–28.
[4] Martínez-Campos C, Burguete-García AI, Madrid-Marina V (March 2017). Role of TLR9 in Oncogenic Virus-Produced Cancer. Viral Immunol. 30 (2): 98–105.
[5] Agrawal, S. & Kandimalla, E. R. Synthetic agonists of Toll‑like receptors 7, 8 and 9. Biochem. Soc. Trans. 35,1461–1467 (2007).
[6] Goodchild, A. et al. Primary leukocytescreens for innate immune agonists. J. Biomol. Screen 14, 723–730 (2009).
[7] Krieg, A. M. Toll‑like receptor 9 (TLR9) agonists in the treatment of cancer. Oncogene 27, 161–167 (2008).
[8] Kochling, J. et al. Anti‑tumor effect of DNA‑based vaccination and dSLIMimmunomodulatory molecules in mice with Ph+ acute lymphoblastic leukaemia. Vaccine 26, 4669–4675 (2008)
[9] Mifsud EJ, Tan AC, Jackson DC. TLR Agonists as Modulators of the Innate Immune Response and Their Potential as Agents Against Infectious Disease. Front Immunol. 2014 Mar 3;5:79.