IL2RA細胞因子人源化小鼠在抗體藥效驗證的應用
2020年一晃已經(jīng)過去小半個月啦，不知道大家是不是還習慣的寫出2019呢？新年的第一節(jié)知識小課堂來嘍，新年新氣象，今天小編為大家?guī)淼囊彩侨碌男∈竽Ｐ?-IL2RA細胞因子人源化小鼠模型。
基本信息
基因功能
IL2RA (interleukin 2 receptor, alpha chain)是一種55kDa大小的糖蛋白，也稱為CD25、Ly-43、p55或Tac。IL2RA主要表達在活化的T細胞、B細胞、胸腺細胞亞群、前B細胞和T調(diào)節(jié)細胞表面，同型二聚體α鏈產(chǎn)生低親和力的受體，與CD122（IL-2Rβ）和CD132（普通γ鏈）結(jié)合形成高親和力IL-2受體以傳導信號。IL2RA對IL-2的親和力和發(fā)揮細胞內(nèi)功能受到嚴格的調(diào)控，在不同類型的細胞中存在差異。IL2RA在許多不同的血液腫瘤細胞表面高水平表達，除了其預后意義之外，IL2RA可能存在于白血病干細胞表面，并啟動致癌信號通路。此外，活化循環(huán)免疫細胞和Treg細胞上IL2RA高表達已經(jīng)被作為IL2免疫療法，用于治療腫瘤和自身免疫性疾病。目前，已經(jīng)確定在各種血液腫瘤適應癥中，給予抗IL2RA放射免疫偶聯(lián)物和免疫毒素，具有相對臨床安全性及有效性，并且一些新型靶向IL2RA的抗體藥物偶聯(lián)劑也在積極地臨床試驗中。
圖1 、激活T細胞中IL2R的活化途徑[1]
表型分析
1、B-hIL2RA小鼠mRNA表達分析
通過RT-PCR對WT和B-hIL2RA小鼠中IL2RA基因表達進行品系特異性分析。
在C57BL/6小鼠中可檢測到mIL2RA mRNA，而hIL2RA mRNA僅在B-hIL2RA純合鼠中檢測到。
2、B-hIL2RA小鼠蛋白表達分析
通過流式細胞術(shù)對野生型C57BL/6和B-hIL2RA純合鼠中IL2RA蛋白表達進行分析。
用抗小鼠CD3ε抗體體內(nèi)刺激野生型C57BL/6和B-hIL2RA純合鼠，收集脾細胞，并用種屬特異性抗IL2RA抗體進行流式細胞術(shù)分析。結(jié)果顯示：在C57BL/6小鼠T細胞表面檢測到mIL2RA，在B-hIL2RA純合鼠T細胞表面檢測到hIL2RA。
3、B-hIL2RA小鼠的白細胞亞群分析
從C57BL/6和B-hIL2RA小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術(shù)測試白細胞亞群的比例。
結(jié)果表明，純合B-hIL2RA小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hIL2RA的人源化不影響T，B，NK，粒細胞，單核細胞，DC和巨噬細胞的分化。
結(jié)果表明，純合B-hIL2RA小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hIL2RA的人源化不影響CD45細胞中mCD4、mCD8以及T細胞中mCD4、mCD8的分化。
從C57BL/6和B-hIL2RA小鼠（n=3）中分離出淋巴結(jié)細胞。通過流式細胞術(shù)測試白細胞亞群的比例。
結(jié)果表明，純合B-hIL2RA小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hIL2RA的人源化不影響T，B，NK胞的分化。
結(jié)果表明，純合B-hIL2RA小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hIL2RA的人源化不影響CD45細胞中mCD4、mCD8以及T細胞中mCD4、mCD8的分化。
4、B-hIL2RA小鼠的體外驗證
結(jié)果表明，鼠IL-2能激活B-hIL2RA小鼠脾細胞中STAT-5蛋白磷酸化，hIL2RA Ab1能阻斷STAT-5蛋白磷酸化，而hIL2RA Ab2不能阻斷STAT-5蛋白磷酸化。
5、IL2RA抗體藥效驗證
將鼠結(jié)腸癌MC38細胞皮下植入純合的B-hIL2RA小鼠中，小鼠根據(jù)體重差進行分組（n=5），分組當天進行給藥。與對照組相比，兩種人IL2RA抗體以不同程度抑制腫瘤生長，證實B-hIL2RA小鼠模型是體內(nèi)IL2RA抗體藥理功效研究的有力工具。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。
小鼠血液淋巴細胞分析
流式細胞術(shù)分析藥效驗證小鼠血液淋巴細胞。在藥效實驗終點采集小鼠血液（n=5），對血液中的淋巴細胞進行流式細胞術(shù)分析，以評估人ILL2RA抗體治療后不同免疫細胞數(shù)量和比例的變化情況。如圖所示，與hIgG1對照組相比，人IL2RA抗體治療組小鼠血液中，CD4+ T細胞顯著減少，而CD8+ T細胞/Treg細胞的比率顯著增加。數(shù)值表示為平均值±SEM。
腫瘤浸潤淋巴細胞（TILs）分析
流式細胞術(shù)分析腫瘤浸潤淋巴細胞（TILs）。在藥效實驗終點收獲腫瘤細胞（n=5），對腫瘤細胞中的淋巴細胞進行流式細胞術(shù)分析，以評估人ILL2RA抗體治療后不同免疫細胞數(shù)量和比例的變化情況。如圖所示，與hIgG1對照組相比，人IL2RA抗體治療組TILs中，CD4+ T細胞、Treg細胞和hCD25+mFoxP3+ T細胞顯著減少，而CD8+ T細胞/Treg細胞的比率顯著增加。數(shù)值表示為平均值±SEM。
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參考文獻
[1]Flynn MJ1, Hartley JA1.The emerging role of anti-CD25 directed therapies as both immune modulators and targeted agents in cancer. Br J Haematol. 2017 Oct;179(1):20-35.
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