NRAMP-1 elisa檢測試劑盒免疫檢測方法
瀏覽次數(shù):673 發(fā)布日期:2020-1-15
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NRAMP-1 elisa檢測試劑盒免疫檢測方法:
(一)夾心法:
可分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法。
雙抗體夾心法將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體;加入待測樣本,形成固相抗體-抗原復(fù)合物,洗滌后加入標(biāo)記特異性抗體并孵育,形成固相抗體-抗原-標(biāo)記抗體復(fù)合物,洗滌除去未結(jié)合的標(biāo)記抗體;加入不同的反應(yīng)物質(zhì)(如酶促底物、堿性溶液、氧化劑等),得到反應(yīng)信號。
雙抗原夾心法與雙抗體夾心法類似,將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗原;加入待測樣本,孵育使樣本中的抗原與固相抗體充分反應(yīng),形成固相抗原-抗體復(fù)合物,洗滌除去未結(jié)合物質(zhì);加入標(biāo)記特異性抗原并孵育,加入反應(yīng)物質(zhì),判讀結(jié)果。
(二)間接法:
間接法僅能檢測抗體,基本原理是將特異性抗原包被在固相載體上,加入待測樣本,形成固相抗原-受測抗體復(fù)合物;孵育洗滌后,加入標(biāo)記抗體。
(三)競爭法:
既檢測抗體,也可檢測抗原。
基本原理是先將抗小分子抗原的特異性抗體包被在固相載體上,然后同時(shí)加入待測樣本與標(biāo)記小分子,待測樣本中的小分子與標(biāo)記小分子競爭與固相抗體相結(jié)合,溫浴一定時(shí)間后洗滌加入不同的反應(yīng)物質(zhì),得到反應(yīng)信號。
(四)捕獲法:
NRAMP-1 elisa檢測試劑盒可測定血清中某種特定的免疫球蛋白,目前主要用于IgM抗體的檢測。通常包被的固相抗體為針對IgM分子μ鏈的抗體,加入待測樣本后,特異及非特異的IgM抗體都會(huì)被固相抗體捕獲,之后加入能夠與特異性抗體結(jié)合的已知抗原,再加入能夠與已知抗原相結(jié)合的標(biāo)記抗體。