盡管大多數(shù)超純C18相可以預(yù)期產(chǎn)生低柱流失,但是需要謹(jǐn)慎選擇替代選擇性的鍵合相,以確保在低UV波長或LC/MS下進(jìn)行分析時柱流失不會引起不可預(yù)見的問題。
需要注意的是,色譜柱的絕對流失取決于許多因素,并且可能會隨時間和系統(tǒng)而變化。
因此,在比較色譜柱流失時,必須在受控條件下進(jìn)行。
本實例對超純ACE C18色譜柱(頂部)的低流失特性與PFP色譜柱(中間)的高流失特性進(jìn)行了比較。
ACE C18-PFP色譜柱(底部)顯示其流失水平與ACE C18相當(dāng),盡管后者包含可以提供替代選擇性的完整PFP官能團(tuán)。
UV流失的比較
在相同條件下對更寬范圍的色譜柱的進(jìn)一步分析證實,領(lǐng)先的高純度C18柱品牌顯示出相似的低水平色譜柱流失。
然而,傳統(tǒng)上推薦改變選擇性的替代鍵合相(即苯基,極性嵌入式,PFP表面化學(xué)物質(zhì))的評估顯示,所有這些非C18色譜柱均有顯著更高的流失。
ACE C18-PFP將低流失水平(典型的領(lǐng)先C18色譜柱品牌)與替代選擇性相結(jié)合,從而為分析者提供了有價值的方法開發(fā)工具。
當(dāng)采用MS檢測時,非C18相給分析者帶來了傳統(tǒng)上使用所出現(xiàn)的額外挑戰(zhàn)。
在極端情況下,柱流失可能會污染檢測器信號并掩蓋重要分析物。
在以下實例中,在梯度運(yùn)行的8-10分鐘時段中監(jiān)測柱流失,此時有機(jī)物的百分比增加至其最大水平,因此柱流失也是最高的。
MS Spectra(左邊系列)提供了在該8-10分鐘窗口中檢測到流失的m/z裂解,而總離子色譜圖(右邊系列)闡明了在相同8-10分鐘時間段內(nèi)所獲得的流失結(jié)果。
通過LC/MS分析,極性嵌入式色譜柱的TIC追蹤和MS光譜(之前通過UV檢測顯示有顯著流失)再次顯示柱流失水平較高。
來自空白運(yùn)行(在沒有連接色譜柱的情況下開展)的MS光譜可以使背景系統(tǒng)流失量化。
ACE C18-PFP色譜柱和領(lǐng)先的C18色譜柱均顯示與空白運(yùn)行相似的流失水平,這表明正在發(fā)生的柱流失可以忽略。