一、明場(chǎng)實(shí)時(shí)圖像調(diào)節(jié)及拍照保存

1.打開cellSens軟件后，首先在攝像控制工具窗口中切換相機(jī)芯片為“彩色模式”，此時(shí)相機(jī)自動(dòng)切換為彩色芯片進(jìn)行明場(chǎng)圖像采圖；接下來點(diǎn)擊“實(shí)時(shí)觀察”對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)覽，隨后在攝像控制工具窗口中將曝光模式調(diào)節(jié)為“自動(dòng)”，最后將曝光模式調(diào)節(jié)到“手動(dòng)”，通過增加或減少曝光時(shí)間來獲得滿意的觀察效果；

 

2.如果明場(chǎng)圖像背景不夠干凈，可以在攝像控制工具窗口中執(zhí)行白平衡操作，點(diǎn)擊“白平衡”后框選預(yù)覽圖像中樣品之外的背景區(qū)域，即可執(zhí)行白平衡；

 

3.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，調(diào)節(jié)拍照的分辨率后點(diǎn)擊“拍照”即可完成對(duì)當(dāng)前預(yù)覽圖像的及時(shí)拍照，對(duì)該圖像另存到指定文件夾，圖像默認(rèn)保存格式為“TIF”格式。

 

二、熒光實(shí)時(shí)圖像調(diào)節(jié)及拍照保存

1.打開軟件后，首先在攝像控制工具窗口中切換相機(jī)芯片為“灰度模式”，此時(shí)相機(jī)自動(dòng)切換為黑白芯片進(jìn)行熒光圖像采圖；接下來勾選高級(jí)熒光模式“SFL”；

 

2.隨后點(diǎn)擊“實(shí)時(shí)觀察”對(duì)熒光圖像進(jìn)行預(yù)覽，并在軟件上方的工具欄中選擇合適的熒光觀測(cè)模式（如DAPI、FITC），將曝光模式調(diào)節(jié)為“自動(dòng)”，根據(jù)熒光表達(dá)的強(qiáng)弱，可以將曝光模式切換到“自動(dòng)”，通過增加曝光時(shí)間來使得熒光表達(dá)更亮，反之亦然；若調(diào)節(jié)曝光時(shí)間超過1s，可以適當(dāng)調(diào)高“增益”值(默認(rèn)是1，可以調(diào)節(jié)到2)來使得更短的曝光時(shí)間達(dá)到相同的熒光亮度；

 

*1、如果覺得熒光樣品的背景不夠干凈，可以執(zhí)行黑平衡操作，點(diǎn)擊“黑平衡”后框選預(yù)覽圖像中熒光樣品之外的背景區(qū)域，即可執(zhí)行黑平衡；

 

*2、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，調(diào)節(jié)拍照的分辨率后點(diǎn)擊“拍照”即可完成對(duì)當(dāng)前預(yù)覽圖像的及時(shí)拍照，對(duì)該圖像另存到指定文件夾，圖像默認(rèn)保存格式為“TIF”格式

 

 

多通道圖像：用黑白相機(jī)芯片+自定義熒光觀測(cè)模式所拍出的熒光圖像，該圖像在軟件中已默認(rèn)添加并使用了相應(yīng)通道的偽彩色，此時(shí)圖像模式為“多通道，16 位圖像”。

 

三、多通道熒光自動(dòng)疊加（CS-ST+ MA）

1. 將工具窗口切換至“流程管理”工具窗口；

2. 選定“自動(dòng)處理”選項(xiàng)；

3. 單擊“多通道”按鈕，按鈕將顯示為已點(diǎn)擊狀態(tài)，此時(shí)該按鈕內(nèi)部的充實(shí)淺黃色的背景；

4. 單擊添加通道按鈕 ，上下文菜單隨即被打開；該上下文菜單中將列出所有當(dāng)前軟件設(shè)置的觀測(cè)模式（DAPI、FITC、CY3、CY5等熒光觀測(cè)模式）；

5. 選定首先要采集的色彩通道，例如藍(lán)色“FUW”，隨后單擊第一個(gè)色彩通道旁邊的小加號(hào)，激活當(dāng)前藍(lán)色通道，并按軟件提示將濾色塊轉(zhuǎn)盤切換至1號(hào)位；

6. 隨后將工具窗口切換至“攝像控制”工具窗口，點(diǎn)擊“實(shí)時(shí)觀察”對(duì)熒光樣品進(jìn)行曝光時(shí)間及增益值進(jìn)行調(diào)節(jié)，達(dá)到一個(gè)最佳的觀察效果；然后切換至“流程管理”工具窗口，單擊讀取設(shè)置按鈕，將最佳觀察效果時(shí)的曝光時(shí)間及增益值讀取到當(dāng)前所激活的熒光通道；

7.后面可以重復(fù)操作第4-6步，添加想要與當(dāng)前已激活通道（例：藍(lán)色通道）組合的其他熒光通道；

8.在流程管理工具窗口中，單擊開始按鈕，隨后軟件中的提示依次切換不同的熒光濾色塊，每次切換相機(jī)都會(huì)自動(dòng)拍一張熒光圖像，待指定多通道組合中的濾色塊轉(zhuǎn)盤切換完成后，軟件自動(dòng)將不同通道下拍攝的多張熒光圖像進(jìn)行熒光疊加，圖像窗口中將顯示所有通道的疊加熒光圖像；

9.將多通道熒光圖像另存為指定文件夾，默認(rèn)的文件保存格式為“TIF”格式，此為原圖保存；

10.如果需要將單個(gè)通道下的熒光圖像保存，點(diǎn)擊“平鋪”按鈕后，將鼠標(biāo)放置在需要保存的單個(gè)熒光通道圖像上，鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)擊“抽取”，軟件會(huì)將該通道的熒光圖像單獨(dú)抽取出來；此時(shí)點(diǎn)擊“圖像”>“印入信息”>并選擇“是”之后再對(duì)該熒光圖像進(jìn)行保存，即可得到一張包含偽彩信息的熒光圖像，圖像格式建議為“TIF”格式。

 

四、標(biāo)尺信息顯示及保存

如果要在軟件中上顯示并保存標(biāo)尺信息，可在進(jìn)行圖像預(yù)覽時(shí)點(diǎn)擊“視圖”>“標(biāo)尺”，標(biāo)尺就會(huì)在圖像上顯示出來；隨后點(diǎn)擊“拍照”，拍照完成后，再點(diǎn)擊“圖像”>“印入信息”>并選擇“是”之后再對(duì)該圖像進(jìn)行保存，標(biāo)尺信息就會(huì)印在該圖像上。

 

五、手動(dòng)大圖拼接（CS-ST+MPC）

1. 將工具窗口切換至“流程管理”工具窗口；

2. 選定“手動(dòng)處理”選項(xiàng)；

3.單擊“手動(dòng)圖像拼接”按鈕，按鈕將顯示為已點(diǎn)擊狀態(tài)，此時(shí)該按鈕內(nèi)部的充實(shí)淺黃色的背景；

4.請(qǐng)確定“自動(dòng)對(duì)齊”按鈕顯示為已點(diǎn)擊狀態(tài)。該按鈕應(yīng)該顯示為
；

5.在流程管理工具窗口中，單擊開始按鈕，軟件將切換到實(shí)時(shí)觀察模式，對(duì)樣品聚焦清楚后，可以移動(dòng)載物臺(tái)使得從樣品的左上角出現(xiàn)在視野里；

6.接下里單擊某個(gè)箭頭按鈕可設(shè)置要將下一幅圖像排列在當(dāng)前圖像的哪一側(cè)，當(dāng)你點(diǎn)擊箭頭時(shí)，軟件會(huì)自動(dòng)采集當(dāng)前的樣品圖像出現(xiàn)出現(xiàn)在圖像窗口里，而該采集圖像右側(cè)會(huì)出現(xiàn)當(dāng)前的實(shí)時(shí)圖像，通過移動(dòng)載物臺(tái)使得實(shí)時(shí)圖像中樣品的右上角部分與采集好左上角的圖像重合；隨后點(diǎn)擊箭頭時(shí)，當(dāng)前樣品左右兩部分重合好的圖像會(huì)被采集，隨后在該采集圖像下方會(huì)出現(xiàn)當(dāng)前的實(shí)時(shí)圖像，通過移動(dòng)載物臺(tái)使得實(shí)時(shí)圖像中樣品到右下角部分和采集好的圖像重合；依次反復(fù)，直至一個(gè)完整的樣品被完全拼出；

7.將已拼接好的的圖像另存為指定文件夾，默認(rèn)的文件保存格式為 “VSI”格式。

 

六、手動(dòng)景深擴(kuò)展（CS-ST+MPC）

1. 將工具窗口切換至“流程管理”工具窗口；

2. 選定“手動(dòng)處理”選項(xiàng)；

3. 單擊“即時(shí)擴(kuò)展景深”按鈕，按鈕將顯示為已點(diǎn)擊狀態(tài)，此時(shí)該按鈕內(nèi)部的充實(shí)淺黃色的背景；

4. 明場(chǎng)圖像做景深擴(kuò)展時(shí)選擇透射（指數(shù)/二次函數(shù)），熒光圖像做景深擴(kuò)展時(shí)選擇反射（指數(shù)/二次函數(shù)）；

5.在流程管理工具窗口中，單擊開始按鈕，此時(shí)圖像窗口下方右側(cè)畫面即為當(dāng)前的樣品焦面的實(shí)時(shí)圖像，而圖像窗口下方左側(cè)畫面顯示即為當(dāng)前焦面上的樣品信息，緩慢微調(diào)過程中，依次達(dá)到樣品不同的焦面，等使用微調(diào)機(jī)構(gòu)從樣品的下焦面走到上焦面后，圖像窗口下方左側(cè)畫面里會(huì)把不同焦面上所有的樣品信息完全累積記錄；而在圖像窗口上方會(huì)自動(dòng)生成一張把不同焦面樣品信息疊加后的圖片，隨后單擊停止按鈕，圖像窗口會(huì)生成一張疊加好全部清晰的圖片；點(diǎn)擊文件> 另存為命令保存新的圖像。保存圖像時(shí)，請(qǐng)始終使用TIF 或VSI 文件格式。

 

七、時(shí)間間隔拍照

1. 激活流程管理工具窗口；

2. 選定“自動(dòng)處理”選項(xiàng)；

3. 單擊“縮時(shí)”按鈕，按鈕將顯示為已點(diǎn)擊狀態(tài)，此時(shí)該按鈕內(nèi)部的充實(shí)淺黃色的背景；

4. 指定完成采集所需的時(shí)間，如 10 秒。在錄制時(shí)間字段中輸入值“00000:00:10”(即 10 秒)。你可以在該字段中直接編輯每個(gè)數(shù)字。為此，只需在要編輯

的數(shù)字前單擊一下；

5. 選擇數(shù)據(jù)段右側(cè)的單選按鈕，以將采集時(shí)間指定為不再更改。鎖形圖標(biāo)會(huì)自動(dòng)出現(xiàn)在所選單選按鈕旁；

6. 指定您要采集的幀數(shù)。在周期數(shù)字段中輸入，例如 10，隨即會(huì)更新間隔字段。它表示兩個(gè)連續(xù)幀之間經(jīng)過的時(shí)間；

7. 在流程管理工具窗口中，單擊開始按鈕，隨即會(huì)立即開始采集時(shí)間序列；

8. 隨后啟動(dòng)流程按鈕會(huì)變?yōu)闀和０粹o，單擊此按鈕將中斷采集流程；

· 停止按鈕將變?yōu)榧せ顮顟B(tài)，單擊此按鈕將停止采集流程，到此時(shí)為止所采集的時(shí)間棧圖像將得到保留；

· 在圖像窗口左下部的狀態(tài)欄中將出現(xiàn)進(jìn)度條，它會(huì)告訴你還需要采集多少幅圖像；

9. 當(dāng)你在流程管理工具窗口中再次看見開始按鈕，同時(shí)進(jìn)度條消失時(shí)，即表示采集已完成；將時(shí)間序列成像另存為指定文件夾，預(yù)設(shè)的文件保存格式為 “VSI”格式。