甲磺酸乙酯(EMS)細(xì)胞突變誘導(dǎo)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
主要用途
YIJI甲磺酸乙酯(EMS)細(xì)胞突變誘導(dǎo)試劑是一種旨在使用烷化劑甲磺酸乙酯誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生變異而產(chǎn)生HPRT或TK基因功能缺失的突變株,成為篩選應(yīng)用標(biāo)記細(xì)胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于動物細(xì)胞和人體細(xì)胞。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,性能穩(wěn)定,突變頻率高。
技術(shù)背景
甲磺酸乙酯(ethyl methanesulfonate,EMS)是一種化學(xué)誘變致畸的烷化劑(alkylating agent)。它將導(dǎo)致細(xì)胞次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase;HPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(thymidine kinase,TK)基因座發(fā)生位點突變,而引起基因功能缺失。由此采用6-硫氫基鳥糞嘌呤(6-thioguanine;6-TG)和5-溴脫氧尿嘧啶(5-Bromodeoxyuridine;BudR)分別篩選TK和HPRT缺失型細(xì)胞,因為6-TG是PURINES的結(jié)構(gòu)替代物,而BUdR是THYMIDINE的結(jié)構(gòu)類似物,當(dāng)TK和HPRT正常的情況下,它們將利用6-TG和BUdR進(jìn)行DNA復(fù)制而使細(xì)胞死亡,反之,它們無法利用,細(xì)胞則繼續(xù)生存。這是負(fù)向選擇。但是HPRT正常的細(xì)胞(例如正常人體細(xì)胞,其X染色體的長臂上帶有此基因)能在氨基嘌呤胸苷(hypoxanthine/aminopterin/thymidine;HAT)培養(yǎng)基中生長,這是正向選擇。