復(fù)方甘麥大棗顆粒對抑郁動物模型的抗抑郁作用及對海馬單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響

摘 要: 目的: 探討復(fù)方甘麥大棗顆粒對動物抑郁模型的抗抑郁作用。方法: 采用小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)、懸尾試驗(yàn)、跳臺試驗(yàn)和利血平引起大鼠排空腦內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)抑郁模型。結(jié)果: 復(fù)方甘麥大棗顆粒 21． 25 g/kg 和 42． 5g / kg 劑量組可明顯延長小鼠強(qiáng)迫游泳累計(jì)不動時間。21． 25 g / kg 劑量組延長小鼠懸尾累計(jì)不動時間。與空白組比較有顯著性差異( P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01) 。復(fù)方甘麥大棗顆�？擅黠@縮短逃避至平臺上的潛伏期 EL( s) ，減少錯誤次數(shù)�？蓪�抗利血平排空腦內(nèi)單胺神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺( DA) 和腦內(nèi)皮質(zhì)酮( CORT) 濃度。結(jié)論: 復(fù)方甘麥大棗顆�？梢愿纳苿游镆钟粜袨�，具有抗抑郁作用，其機(jī)制可能與改善腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺( DA) 傳遞，降低皮質(zhì)激素分泌有關(guān)。

關(guān)鍵詞: 復(fù)方甘麥大棗顆粒; 抗抑郁; 行為學(xué); DA; 皮質(zhì)酮

現(xiàn)代生活的快節(jié)奏以及精神、心理等方面的壓力，使抑郁癥的發(fā)病率明顯提高。嚴(yán)重軀體疾病、慢性病、腦器質(zhì)性疾病容易誘發(fā)或?qū)е乱钟舭Y，其中內(nèi)科病患者中抑郁發(fā)生率為 12% ～ 36% ; 巴金森氏病發(fā)生抑郁者為 50% ～ 70% ;腦卒中后抑郁發(fā)生率為 30% ～ 60% ; 老年期癡呆抑郁發(fā)生率為 10% ～ 40% ; 兒童患病率為1% 。然而目前尚沒有一種有效的治療方法能夠在療效、不良反應(yīng)及預(yù)防復(fù)發(fā)方面盡如人意，約 15% 的患者伴有自殺傾向，對社會穩(wěn)定與經(jīng)濟(jì)發(fā)展造成了很大影響。世界衛(wèi)生組織( WHO) 預(yù)測到2020 年抑郁癥將成為第二大致殘疾病。因此，抗抑郁藥物的研究越來越受到人們的重視。

中藥復(fù)方具有成分多、作用環(huán)節(jié)多、靶點(diǎn)多的特點(diǎn)，盡管單一成份含量低，作用不明顯，但可通過多靶點(diǎn)起作用，產(chǎn)生協(xié)同效益。既彌補(bǔ)了有效成份含量低的欠缺，也降低了不良反應(yīng)。因此，對于研究中藥復(fù)方的抗抑郁作用也越來越廣泛。為了證實(shí)復(fù)方甘麥大棗顆粒多環(huán)節(jié)治療 FD 的作用和確切機(jī)制，為復(fù)方甘麥大棗顆粒臨床應(yīng)用的拓展提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，本文通過多種抑郁模型對復(fù)方甘麥大棗顆粒的抗抑郁作用和相關(guān)機(jī)制進(jìn)行了研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1． 1 實(shí)驗(yàn)用藥物 復(fù)方甘麥大棗顆粒: 由江蘇省中醫(yī)院制劑部提供。批號: 20140501 鹽酸氟西汀膠囊: 由禮來蘇州制藥有限公司提供。批號: 3436A201403 氫溴酸東莨菪堿注射液: 由上海禾豐制藥有限公司提供。批號: 02140401、利血平 Sigma 公司批號;BCBk8806v。

1． 2 實(shí)驗(yàn)用儀器 大 / 小鼠跳臺實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) XR-3TB；強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)；懸尾實(shí)驗(yàn)系統(tǒng): 上海欣軟信息科技有限公司制造。

1． 3 實(shí)驗(yàn)用動物和飼料 ICR 小鼠，體質(zhì)量 20 ～ 22 g，由南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號: SCXK － ( 蘇) 2014－ 0001。全價營養(yǎng)顆粒飼料: 由江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供。批號: 20140618。

1． 4 實(shí)驗(yàn)條件 室溫( 20 ± 2) ℃ ，濕度 55% ～ 65% ，光照適度，通風(fēng)潔凈良好。

1． 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用 SPSS 16． 0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用( x珋± s) ，采用 t 檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2． 1 實(shí)驗(yàn)分組和劑量 ①取 ICR 小鼠 150 只，雌雄各半，體質(zhì)量20 ～22 g，隨機(jī)分為以下 5 組，每組 30 只�？瞻捉M: 等量 NS，鹽酸氟西汀組: 6． 67 mg/kg; 復(fù)方甘麥大棗顆粒大劑量組: 42． 5 g/kg，復(fù)方甘麥大棗顆粒中劑量組: 21． 25 g/kg，復(fù)方甘麥大棗顆粒小劑量組: 10． 63 g/kg，給藥容量 20 m L/kg 分別進(jìn)行對小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)和跳臺實(shí)驗(yàn)。②取 SD 大鼠 60 只，雄性，體質(zhì)量 200 ～ 220 g，隨機(jī)分為 6 組，每組 10 只。適應(yīng)飼養(yǎng) 3 天后，每日給藥 1 次，正常組: 等量蒸餾水，1 mL/100 g，模型組: 等量蒸餾水，鹽酸氟西汀組: 5． 33 mg/kg，復(fù)方甘麥大棗顆粒低劑量組: 7． 5 g/kg，復(fù)方甘麥大棗顆粒中劑量組: 含生藥 15 g / kg，復(fù)方甘麥大棗顆粒高劑量組: 30 g/kg，1 m L/100 g，給藥容量 10 m L/kg。

2． 2 復(fù)方甘麥大棗顆粒對小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)在安靜的環(huán)境下進(jìn)行，在正式強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行預(yù)游泳實(shí)驗(yàn)，將小鼠分別放入水深 10 cm，水溫 25 ℃ ，5000 m L 容器內(nèi)，適應(yīng)性游泳 2 min，預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后連續(xù)給藥 4 周。末次給藥后進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)，給藥 30 min 后，放入與預(yù)游泳相同的環(huán)境中，適應(yīng)性游泳 2 min 后計(jì)算后 4 min 內(nèi)小鼠強(qiáng)迫游泳的累計(jì)不動時間。( 小鼠表現(xiàn)為被動漂，掙扎行為消失持續(xù) 1min 被認(rèn)定為不動狀態(tài)。

2． 3 復(fù)方甘麥大棗顆粒對小鼠懸尾實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)在安靜的環(huán)境下進(jìn)行，連續(xù)給藥 4 周，末次給藥 30 min 后分別將每組小鼠尾部距末端 2 cm 處用膠帶條固定懸掛，適應(yīng) 2 min后計(jì)算 4 min 內(nèi)小鼠懸尾累計(jì)不動時間( 小鼠表現(xiàn)為被動懸掛，肢體運(yùn)動消失時被認(rèn)定為不動狀態(tài)) 。

2． 4 復(fù)方甘麥大棗顆粒對小鼠跳臺實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)在安靜的環(huán)境下進(jìn)行，在正式跳臺實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練。連續(xù)給藥四周后，末次給藥 30 min 后，將小鼠輕放于跳臺上，記錄小鼠停留在平臺上的潛伏期( SDL) 。小鼠自平臺跳下，四肢接觸電柵時，立即給予0.2mA電刺激，記錄小鼠逃避至平臺上的潛伏期( EL) 。記錄其第 1 次跳下平臺的時間，以及 5 min 內(nèi)跳下平臺次數(shù)( 錯誤次數(shù)) ，計(jì)算各組小鼠跳臺潛伏期以及錯誤次數(shù)。

2． 5 復(fù)方甘麥大棗顆粒對給予東莨菪堿注射液后小鼠跳臺實(shí)驗(yàn) 末次實(shí)驗(yàn)前腹腔注射東莨菪堿注射液 1 次，給藥30 min 后，將小鼠置于跳臺上，以小鼠四肢全部落到銅柵上為標(biāo)志，記錄小鼠停留在平臺上的潛伏期( SDL) 。小鼠自平臺跳下，四肢接觸銅柵時，立即給予0.2mA電刺激，記錄小鼠逃避至平臺上的潛伏期( EL) 。記錄其第 1 次跳下平臺的時間，以及 5 min 內(nèi)跳下平臺次數(shù)( 錯誤次數(shù)) ，計(jì)算各組小鼠跳臺潛伏期以及錯誤次數(shù)。

2． 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 各組大鼠連續(xù) 4 周，末次給藥后，各組大鼠即刻腹腔注射利血平 4 mg/kg，之后 2、4、6、18 h 測定大鼠的肛溫。將體溫計(jì)探頭插入大鼠肛門內(nèi)，深度以溫度計(jì)探頭完全進(jìn)入肛門為準(zhǔn)，維持至少 2 min。動物處死前禁食不禁水，24 h 后處死大鼠，迅速置 － 20 ℃ 冰箱中 15 min后斷頭取出大腦，取 0． 2 g 置 2 m L 生理鹽水中冰浴勻漿，3000 r / min 離心 10 min，取上清液，采用 ELISA 法測定單胺類神經(jīng)遞質(zhì) DA，CORT 的含量，結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。比較各組間的差異。其余腦組織作病理組織學(xué)檢查。

4 討論

現(xiàn)代生活的快節(jié)奏以及精神、心理等方面的壓力，使抑郁癥的發(fā)病率明顯提高。嚴(yán)重軀體疾病、慢性病、腦器質(zhì)性疾病容易誘發(fā)或?qū)е乱钟舭Y，其中內(nèi)科病患者中抑郁發(fā)生率為 12% ～ 36% ; 巴金森氏病發(fā)生抑郁者為 50% ～ 70% ;腦卒中后抑郁發(fā)生率為 30% ～ 60% ; 老年期癡呆抑郁發(fā)生率為 10% ～ 40% ; 兒童患病率為 1% 。

然而目前尚沒有一種有效的治療方法能夠在療效、不良反應(yīng)及預(yù)防復(fù)發(fā)方面盡如人意，約 15% 的患者伴有自殺傾向，對社會穩(wěn)定與經(jīng)濟(jì)發(fā)展造成了很大影響。世界衛(wèi)生組織( WHO) 預(yù)測到 2020 年抑郁癥將成為第二大致殘疾病。因此，抗抑郁藥物的研究越來越受到人們的重視。

抑郁癥( depression) 是一種以顯著而持久的情緒低落、言語、減少、精神和行動遲緩等，表現(xiàn)為各種軀體癥狀、生理功能障礙的臨床綜合癥。在中醫(yī)觀念中它屬于郁癥范疇，總因郁怒、思慮、悲哀、憂愁七情之所傷。導(dǎo)致臟腑陰陽氣血失調(diào)而成�，F(xiàn)代化學(xué)合成藥; 如安定、氟西汀等在治療和緩解抑郁癥狀方面有一定的療效; 但是長期服用會出現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng); 導(dǎo)致患者被迫停止治療。因此，醫(yī)學(xué)界越來越重視從傳統(tǒng)中藥中開發(fā)抗抑郁藥。中醫(yī)藥在治療抑郁癥方面有獨(dú)特的優(yōu)勢，其不良反應(yīng)低、療效顯著。中藥在治療抑郁癥方面的優(yōu)勢已得到越來越多人的認(rèn)可。

甘麥大棗湯治療抑郁癥臨床資料表明總有效率 90%以上。章永紅名中醫(yī)根據(jù)抑郁癥多為心氣虛證在臨床運(yùn)用甘麥大棗湯加合歡皮，地龍治療，取得較滿意療效，而且患者并發(fā)癥少，不良反應(yīng)小，有較好的治療依從性。臨床使用甘麥大棗湯加合歡皮，地龍治療后，臨床效果可靠，用藥安全。臨床觀察使用該方有效率在 93． 7% 。為了進(jìn)一步驗(yàn)證復(fù)方甘麥大棗湯的有效性，進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。

本實(shí)驗(yàn)采用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)是國際上用于抗抑郁常見動物模型，其原理均是通過對動物施以無法逃避的應(yīng)激刺激，造成動物的行為絕望以模擬人類的抑郁癥癥狀。結(jié)果表明: 復(fù)方甘麥大棗顆�？裳娱L小鼠懸尾和強(qiáng)迫游泳累計(jì)不動時間。對給予東莨菪堿所至小鼠記憶障礙后，復(fù)方甘麥大棗顆�？裳娱L小鼠跳臺潛伏期，減少錯誤次數(shù)。說明給予復(fù)方甘麥大棗顆粒后，對東莨菪堿所至記憶障礙有一定的改善作用。

利血平是一種抗腎上腺素能降壓藥，可消耗大腦內(nèi)的腎 上腺素、5－ 羥色胺等神經(jīng)遞質(zhì)。作為降壓藥，長期應(yīng)用利血平可引起一系列抑郁癥狀，如失眠、悲觀、失望憂愁、沮喪，甚至部分病人可以產(chǎn)生自殺念頭等。藥理學(xué)研究顯示，利血平的藥理作用是通過消耗腦內(nèi)神經(jīng)末梢囊泡內(nèi)的單胺遞質(zhì)而實(shí)現(xiàn)其作用，實(shí)驗(yàn)采用 4 mg/kg 利血平腹腔注射，可造成 5 － HT、NA、DA 等與人類精神情感活動有關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)的改變，中腦一邊緣葉 DA 系統(tǒng)主要調(diào)控情緒，實(shí)驗(yàn)表明復(fù)方甘麥大棗顆粒各劑量組有阻斷利血平排空腦內(nèi)單胺多巴胺( DA) 神經(jīng)遞質(zhì)的趨勢，但作用不明顯。

研究證 實(shí) 抑 郁 癥 患 者 血 漿 的 促 腎 上 腺 皮 質(zhì) 激 素( ACTH) 和 CORT 均濃度升高，而經(jīng)抗抑郁治療后隨著抑郁緩解兩者濃度下降。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明復(fù)方甘麥大棗顆粒通過降低腦內(nèi)皮質(zhì)酮( CORT) 濃度治療抑郁癥。

采用利血平誘發(fā)抑郁大鼠 24 h 內(nèi)，病理組織學(xué)檢查表明各組動物的腦組織海馬 CA1 和 CA3 區(qū)病理組織形態(tài)學(xué)無明顯改變�？赡芘c一次注入利血平有關(guān)。以上實(shí)驗(yàn)為復(fù)方甘麥大棗顆粒用于臨床通過了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。