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如何用TL2020組織研磨破碎儀研磨內(nèi)臟及腫瘤細胞提取RNA

瀏覽次數(shù):6462 發(fā)布日期:2015-8-13  來源:鼎昊源科技

鼎昊源科技通過大量樣品破碎測試發(fā)現(xiàn),動物組織樣品相比其他樣品更難破碎,特別是一些內(nèi)臟組織、結(jié)締組織、心臟肌肉組織、肺部組織,一般很難用手工或者常規(guī)組織勻漿儀徹底破碎。因為這些動物組織樣品一般韌性較大,如果使用手工研磨或者組織勻漿儀,不僅一次處理量太少、易污染且難清洗,處理后的樣品還不夠均勻細致,達不到后續(xù)提取RNA等實驗的要求。2015年3月 - 4月,北京某生物公司研發(fā)人員使用(又稱TL2020高通量組織研磨儀)研磨內(nèi)臟及腫瘤細胞,后續(xù)提取RNA,實驗順利,效果很好,以下是本次研磨實驗的主要流程,可供相關(guān)實驗人員參考:

【材料準備】

·樣品種類:人體腫瘤細胞、胰腺、前列腺、脂肪、肌肉,每個組織各研磨2個樣品,用液氮處理保存。

·研磨配件種類:鼎昊源TL2020組織研磨破碎儀2.0ml研磨管適配器(28×2.0ml)1對,6mm不銹鋼研磨珠若干顆。

【研磨實驗流程】

1. 高溫滅菌預(yù)處理6mm不銹鋼研磨珠;

2. 將滅菌處理過的研磨珠與研磨管適配器置入液氮中同時進行預(yù)冷處理;

3. 將樣品從液氮中取出,在研缽中切割成約4-5mm寬的樣品小塊。

4. 在2ml無菌圓底離心管(進口)中依次加入:預(yù)冷6mm研磨鋼珠1顆、切好的樣品塊1塊、預(yù)冷6mm研磨鋼珠1顆。

5. 確保離心管中有2顆6mm研磨鋼珠和1塊樣品塊后,快速蓋好管蓋,對稱放入預(yù)冷的2.0ml研磨管適配器孔槽中。

6. 將適配器固定在的兩個搖臂上,設(shè)置轉(zhuǎn)速1800rpm,時間120S(胰腺樣品180S),一鍵開始研磨。

8. 研磨時間結(jié)束,卸載適配器取出離心管,在管中快速加入裂解液,然后按照后續(xù)RNA提取實驗步驟操作。

【研磨效果】

·后續(xù)成功提取出RNA,且電泳圖條帶清晰可見。

圖1:實機照片

圖2:離心管中研磨后的樣品

圖3:提取的RNA電泳圖

 

本實驗中,使用一次性高速破碎56個2ml的內(nèi)臟樣品組織,不僅操作靈活方便,還能安全輕松地進行液氮冷凍研磨操作,保證了RNA提取等溫度敏感性后續(xù)實驗的順利進行。此外,用TL2020進行類似的動物樣品組織研磨,避免了樣品間的交叉污染,省去了清洗儀器的繁瑣工作,對于樣品量巨大且需要無菌操作的實驗,無疑大大提高了效率。

聲明:本文由鼎昊源科技原創(chuàng),不經(jīng)同意嚴禁轉(zhuǎn)載抄襲,違者必究!
聲明:本文由鼎昊源科技原創(chuàng),不經(jīng)同意嚴禁轉(zhuǎn)載抄襲,違者必究!
來源:鼎昊源(天津)生物科技有限公司
聯(lián)系電話:010-64838766
E-mail:chenyajing@herosbio.com

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