細(xì)胞培養(yǎng)用水的污染來(lái)源有很多種,比如細(xì)菌、酵母或霉菌等。這些污染物通常肉眼可見(jiàn),或者在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)。然而,化學(xué)來(lái)源的污染物或其它生物媒介也可能會(huì)影響所培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)、形態(tài)學(xué)或細(xì)胞行為,但是它們無(wú)法用裸眼檢測(cè)到。因此細(xì)胞培養(yǎng)的用水必須不含微生物,尤其是內(nèi)毒素、無(wú)機(jī)離子(重金屬,如鉛、鋅等),或有機(jī)復(fù)合物(腐殖酸,單寧酸,殺蟲(chóng)劑等)。如需了解更多信息,請(qǐng)參閱參考文獻(xiàn)[1,2]。自來(lái)水(龍頭水)中典型的雜質(zhì)和用于細(xì)胞培養(yǎng)的目標(biāo)值如表1所示。
本實(shí)驗(yàn)的目的是為了評(píng)估Arium pro UF系統(tǒng)生產(chǎn)的超純水是否能夠安全無(wú)恙地輕松用于細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用。在本研究中,我們以即用型CDM4PERMab(Hyclone)培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)PER.C6 EpCAM細(xì)胞作為對(duì)照,同時(shí)分別用Arium pro UF生產(chǎn)出來(lái)的水(UF水)和RO水來(lái)配制CDM4PERMab(Hyclone)粉末培養(yǎng)基。在本應(yīng)用指南中所使用的RO水?dāng)?shù)據(jù)是通過(guò)新一代Arium高級(jí)系統(tǒng)的舊款模型(Arium RO)而獲得的。每個(gè)培養(yǎng)批次的結(jié)果用于評(píng)估由Arium pro UF系統(tǒng)生產(chǎn)的水是否適合用于PER.C6 EpCAM細(xì)胞的培養(yǎng)。
本實(shí)驗(yàn)中所使用的PER.C6細(xì)胞系來(lái)源于人成視網(wǎng)膜細(xì)胞,如今也應(yīng)用于重組蛋白的表達(dá)和單克隆抗體(Mab生產(chǎn))的制備,以及用于治療性蛋白和單克隆抗體的生產(chǎn)。
實(shí)驗(yàn)方法
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實(shí)驗(yàn)結(jié)果
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結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果清楚地顯示了用UF水配制的粉末培養(yǎng)基(CDM4PERMab培養(yǎng)基)比市場(chǎng)上在售的即用型培養(yǎng)基更加適合PER.C6 EpCAM細(xì)胞系的培養(yǎng)。PER.C6 EpCAM細(xì)胞系在用UF水配制的培養(yǎng)基中培養(yǎng)后的生長(zhǎng)特征與對(duì)照組中用即用型CDM4PERMab培養(yǎng)基培養(yǎng)后的特征相似。 此外,我們還觀察到當(dāng)實(shí)驗(yàn)在Spinner Flasks中進(jìn)行時(shí),細(xì)胞系樣品在用UF水配制的培養(yǎng)基中培養(yǎng)與用RO水配制的培養(yǎng)基中培養(yǎng)相比,細(xì)胞生長(zhǎng)更加良好。在這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞密度基本都變得很高,而O2不再是限制性因素。因此我們得出結(jié)論,RO水中因?yàn)橛懈邼舛鹊膬?nèi)毒素或無(wú)機(jī)鹽,因此影響了細(xì)胞生長(zhǎng)。
這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果都通過(guò)在Spinner Flasks中培養(yǎng)PER.C6 EpCAM細(xì)胞系而獲得的單抗產(chǎn)量得到進(jìn)一步驗(yàn)證與體現(xiàn)。PER.C6 EpCAM細(xì)胞系在用Arium pro UF超純水配制的培養(yǎng)基樣品中培養(yǎng)能夠獲得最高的單抗產(chǎn)量,對(duì)照組(使用即用型培養(yǎng)基)的產(chǎn)量稍低。這兩種情況的單抗產(chǎn)量都不同于RO水樣品,在RO水樣品中培養(yǎng)后單抗產(chǎn)量反而下降。
綜上,我們總結(jié)出Arium pro UF系統(tǒng)是最適合用于PER.C6 EpCAM細(xì)胞系的細(xì)胞培養(yǎng)的,因?yàn)樵撍到y(tǒng)將水中的雜質(zhì)含量降到了最低,如無(wú)機(jī)離子,有機(jī)化合物等,尤其是將內(nèi)毒素含量降至極為痕量的水平。這一結(jié)果在最新的實(shí)驗(yàn)中也得到了驗(yàn)證[4]。
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參考文獻(xiàn)/更多信息
[1] ASTM Standard Guide for Bio-Applications Grade Water D 5196-06
[2] Whitehead P.: Water Purity and Regulations, in Medicines from Animal Cell Culture (eds. Stacey, G. and Davis, J.), John Wiley & Sons, Ltd (2007)
[3] Freshney I. R.: Culture of Animal Cells – A Manual of Basic Technique and Specialized Applications-6th edition, John Wiley & Sons, Inc. , USA (2010)
[4] Schmidt K. und Herbig E.: “Weniger ist mehr –Quantitative Endotoxinbestimmung von Reinstwasser“, Laborpraxis, 5, 36. Jhg., (2012)