利用CORTECS實心核顆粒色譜柱進行HPLC梯度方法轉換
利用CORTECS實心核顆粒色譜柱進行HPLC梯度方法轉換
Jonathan E. Turner, Bonnie A. Alden, Mia Summers, Kenneth Berthelette 和 Kenneth J. Fountain
沃特世公司(美國馬薩諸塞州米爾福德)
簡介
將使用填充了大顆粒的大體積色譜柱的HPLC梯度方法轉換至填充高效CORTECS 2.7 μm顆粒的小體積色譜柱，可輕松縮短分析時間、節(jié)省溶劑與樣品消耗量，最終節(jié)約成本。在轉換HPLC梯度方法時，可通過適當調整方法條件和選擇相當的色譜柱填料來避免對色譜分離性能的影響。
下述應用紀要展示了針對阿巴卡韋相關化合物的典型HPLC梯度方法進行適當的方法轉換。阿巴卡韋(Ziagen®)是一種核苷類逆轉錄酶抑制劑，被用于抗HIV的治療。該樣品由五種化合物組成，其中四種為主要成分阿巴卡韋的相關物質，如圖1所示。此類檢測常用的色譜柱為全多孔C18, 5 μm, 4.6 x 150 mm色譜柱。通過轉換為CORTECS C18, 2.7 μm色譜柱，可大大縮短該梯度方法的分析時間，同時還能保持目標峰的選擇性和分離度。
結果與討論
基于此類檢測常用的色譜柱為全多孔C18, 5 μm色譜柱，因此選擇CORTECS C18, 2.7 μm填料用于方法轉換。向2.7 μm顆粒填充的色譜柱轉換時需要75 mm的色譜柱長度來保持L/dp比例。該方法轉換中選擇4.6 x 75 mm的色譜柱。色譜柱長度的變化需要將進樣體積從8 L調整為4 μL。因為色譜柱的內徑并無變化，所以僅根據填料粒度的變化來調整流速。調整后的流速經計算為1.85 mL/min。色譜柱配置與流速的調整需要對每個時間段的梯度進行調整，從而確保在同等色譜柱體積條件下進行分離。
表1和圖2顯示了方法轉換的對比情況。采用CORTECS C18, 2.7 μm色譜柱的轉換方法與采用全多孔C18, 5 μm色譜柱的方法具有相同的選擇性。同時還保持了兩對關鍵峰的分離度值。CORTECSC18, 2.7 μm, 4.6 x 75 mm色譜柱生成的反壓為4400 psi，完全在HPLC儀器的壓力限值(5000 psi)內。將HPLC梯度法轉換至CORTECS C18, 2.7 μm色譜柱，分析時間縮短約四倍，同時溶劑消耗量節(jié)省了兩倍。
結論
可輕松將使用填充大顆粒的大體積色譜柱的HPLC梯度方法轉換至填充高效CORTECS顆粒的小體積色譜柱。本應用紀要介紹對阿巴卡韋相關物質的典型HPLC梯度方法的進行成功轉換，其通量增加了約四倍，同時保持了色譜分離性能。除了節(jié)省了時間外，溶劑消耗量還降低了約兩倍。當采用CORTECS C18, 2.7 μm, 4.6 x 75 mm色譜柱時，
所生成的反壓為4400 psi，完全在HPLC儀器的壓力限值(小于5000 psi)內。HPLC梯度方法向CORTECS 2.7 μm色譜柱轉換時增加了通量，降低了溶劑消耗量，從而大大節(jié)約了成本。
