利用Xevo TQD定量測定基因毒性雜質(zhì)
利用Xevo TQD定量測定基因毒性雜質(zhì)
Joanne Mather, Dominic Moore, Robert S. Plumb 和 Paul Rainville
沃特世公司(美國馬薩諸塞州米爾福德)
簡介：
烷基磺酸，尤其是甲磺酸、苯磺酸和對甲苯磺酸，作為一類常用 的烷化劑，在制藥行業(yè)中常被用作烷基化試劑和催化劑，并在API 的化學(xué)合成中用于純化步驟。此外，為了改善化學(xué)性質(zhì)或提高生 物利用度，這些磺酸也常用作藥物的最終成鹽。
合成反應(yīng)或再結(jié)晶步驟中任何殘留醇的存在都可能導(dǎo)致形成磺酸 的烷基酯。許多此類甲磺酸酯、苯磺酸酯或甲苯磺酸酯都被認為 具有基因毒性，而其它酯類也可能存在基因毒性，因此需要在藥 物和藥品中進行監(jiān)測。
過去用于分析此類烷基磺酸酯的典型方法均建立在GC/MS或HPLC/UV/ MS的基礎(chǔ)之上，其中的衍生化步驟通常需要大約20到30分鐘的運 行時間。之前，我們已經(jīng)展示了如何通過使用UPLC?/MS在不到5分 鐘的運行時間內(nèi)獲得良好的結(jié)果。
在這篇應(yīng)用紀(jì)要中，我們將會介紹儀器設(shè)備的最新進展如何針對 這些基因毒性雜質(zhì)提供更強的分析能力和易用性。我們還將展示 如何利用具有正負離子切換功能的Xevo TQD所擁有的高靈敏度縮短 此類雜質(zhì)的分析時間。此外，利用RADAR?降低基質(zhì)干擾有助于加 快方法開發(fā)過程。
實驗：
液相色譜條件：
LC系統(tǒng)： ACQUITY UPLC
色譜柱： ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱，
2.1 x 50 mm, 1.8 μm
柱溫： 45 ?C
進樣體積： 15 μL(20 μL定量環(huán)，部分定量環(huán)模式)
流動相A： 98 H20 2% MeOH 0.1%甲酸
流動相B： 98 MeOH 2% H2O 0.1%甲酸
| 梯度表 時間(min) |
流速 |
%A |
%B |
曲線 |
|
初始 |
0.600 |
95.0 |
5.0 |
—— |
|
2.50 |
0.600 |
2.0 |
98.0 |
6 |
|
3.00 |
0.600 |
2.0 |
98.0 |
6 |
|
4.00 |
0.600 |
95.0 |
5.0 |
1 |
|
4.50 |
0.600 |
95.0 |
5.0 |
1 |
負離子模式：
毛細管電壓： 0.8 kV
功能類型： 3通道的MRM
|
通道反應(yīng) |
錐孔電壓 |
碰撞能量 |
化合物 |
|
95.00 > 79.90 |
40.0 |
15.0 |
甲磺酸 |
|
157.00 > 79.90 |
45.0 |
24.0 |
苯磺酸 |
|
171.00 > 79.90 |
48.0 |
26.0 |
家苯磺酸 |
正離子模式:
毛細管電壓： 0.5 kV
|
通道反應(yīng) |
錐孔電壓 |
碰撞能量 |
化合物 |
|
173.10 > 77.00 |
25.0 |
16.0 |
甲苯磺酸酯 |
|
187.00 > 77.00 |
25.0 |
22.0 |
苯磺酸乙酯 |
|
187.00 > 155.00 |
30.0 |
10.0 |
對甲苯磺酸甲酯 |
|
201.00 > 173.00 |
25.0 |
10.0 |
對甲苯磺酸乙酯 |
|
229.10 > 91.00 |
40.0 |
20.0 |
2S縮水甘油基對甲苯磺酸酯 |
結(jié)果與討論：
使用乙腈為多種已知基因毒性雜質(zhì)配制1 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后用5%乙腈將濃度稀釋為0.1 至500 ng/mL。此外，還制備了一種樣品溶液： 將10 mg苯磺酸氨氯地平片磨碎并溶解，然 后標(biāo)準(zhǔn)添加1.5 μg基因毒性雜質(zhì)。
借助于IntelliStart，使用各個標(biāo)準(zhǔn)溶液幫助調(diào) 諧MS。即便在最佳的色譜性能下，也可能發(fā) 生共流出。在采集多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)定量 質(zhì)譜數(shù)據(jù)的同時，采集來自于基質(zhì)的定性質(zhì) 譜掃描數(shù)據(jù)有助于監(jiān)測可能的干擾化合物， 從而確保檢測的耐用性和重現(xiàn)性。
在RADAR模式下，采集MRM數(shù)據(jù)的同時可以采 集正離子和負離子模式下整個范圍的MS全掃 描譜圖。該過程對MRM數(shù)據(jù)質(zhì)量基本無影響。 因此，您可以在準(zhǔn)確定量目標(biāo)化合物的同時， 追蹤其它樣品基質(zhì)的組分，從而讓您對樣品 有更加深入的理解。
RADAR功能之所以可以實現(xiàn)，是建立在Xevo TQD在MS、MS/MS、正離子與負離子模式超快 的切換速度且不會影響性能的基礎(chǔ)之上的。 使用RADAR輔助LC/MS/MS方法開發(fā)，以對加標(biāo) 藥片溶液中的雜質(zhì)進行分析。利用最終所開 發(fā)的方法來驗證這套液質(zhì)系統(tǒng)對基因毒性雜 質(zhì)檢測的線性和靈敏度
結(jié)論：
與UPLC聯(lián)用，串聯(lián)四極桿檢測器Xevo TQD是基因毒性雜質(zhì)分析的最佳工具。UPLC/Xevo TQD可以提供很好的靈敏度及快速 的分析方法。利用其多種特點，如IntelliStart和RADAR、正負 離子切換以及“所有時間內(nèi)所有數(shù)據(jù)”的生成，可快速輕松 地開發(fā)出檢測的分析方法。這將顯著提高了實驗室效率， 以應(yīng)對不斷增長的科研和監(jiān)管需求。
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