最小化或者減少背景污染物的建議：所有的溶劑和酸、堿、緩沖鹽都是化學(xué)品，沒有一種是100%純的。因此，在LC/MS中總是存在著一些化學(xué)背景。為了改善數(shù)據(jù)質(zhì)量，將干擾以及背景噪音減少到最小是非常值得考慮的。在此我們給大家提出一些小建議，供大家參考。

 

a. 使用最高純度的試劑 – HPLC 級(jí)或更高純度。

  i.最好使用Fisher Optima grade

    1.有些 HPLC 級(jí)試劑含有聚乙二醇類（PEG）化合物，紫外檢測(cè)器無法檢測(cè)它們的存在。

    2.有些HPLC級(jí)試劑含有鐵離子 (Fe⁺³)

  ii.水可能是污染物的一個(gè)主要來源

    3.必須對(duì)在線的純水系統(tǒng)(Milli-Q)進(jìn)行維護(hù)。18 M歐姆的水也不是完全沒有有機(jī)污染物的。

    4.瓶裝水不一定比Milli-Q制得的水更好，因?yàn)樵谄垦b水開啟以后，它可能會(huì)積聚污染物。

    5.不推薦在塑料容器內(nèi)儲(chǔ)存水。

    6.將水通過一根干凈的C₁₈色譜柱以除去有機(jī)物質(zhì)而進(jìn)一步純化，這可以通過一個(gè)高壓二元梯度和一根C₁₈的保護(hù)柱而在線進(jìn)行。

 

b. 添加劑，例如乙酸可能含有大量的鐵。100ppb聽起來似乎是很低的濃度，可是，100ppb＝100ng/L或者100pg/mL。

  i.乙酸所形成鐵的加合物會(huì)導(dǎo)致強(qiáng)的ESI⁺ 質(zhì)譜圖。

  ii.甲酸已被證明含有較少的鐵離子。

 

c. 加入最低濃度的添加劑，可以減少化學(xué)背景噪音、增加信噪比和靈敏度。

 

a. 瓶子和蓋子，樣品提取板：

  i.Waters 樣品瓶是經(jīng)過質(zhì)量控制的， 其他品牌可能沒那么潔凈。

  ii.帶墊片的樣品瓶蓋，因含有塑膠或者粘合劑，可能會(huì)污染自動(dòng)進(jìn)樣器。

  iii.樣品提取板是塑料材質(zhì)的，可能有增塑劑釋出 (例如鄰苯二甲酸二辛酯污染物)。

  iv.樣品提取板膠合金屬箔片的蓋子可能會(huì)有粘合劑物質(zhì)流失。

 

b. 玻璃器皿

  i.用普通的洗滌劑洗滌后，玻璃器皿上可能有洗滌劑殘留(聚乙二醇類化合物) 及其它 “粘性的” 物質(zhì)污染。

  ii.應(yīng)該用即將使用的流動(dòng)相品質(zhì)的試劑進(jìn)行沖洗。

 

c. 塑料容器或管路:

不要將溶劑或者水儲(chǔ)存于塑料的溶器中 (因?yàn)槠渲袝?huì)如鄰苯二甲酸二辛酯污染物)。

 

a.含聚乙二醇類化合物、油脂、維生素等等。 

b.在處理能夠接觸流動(dòng)相或者樣品的HPLC部件時(shí)，請(qǐng)戴手套。

 

a. 樣品基質(zhì)中可能含有鹽和其它不期望帶入的物質(zhì)。當(dāng)制備針頭清洗液的時(shí)候，必須考慮基質(zhì)的溶解性。

  i.無機(jī)鹽類在高有機(jī)相比例的溶液中是不溶解的，避免使用含有Na⁺、K⁺ 、PO₄^-3的緩沖液，因?yàn)樗鼈兪遣粨]發(fā)的。含NH₄⁺ 的醋酸鹽或者甲酸的緩沖液具有揮發(fā)性，并且是與MS兼容的。

  ii.蛋白質(zhì) (例如組織，血液或者血清樣品中的) 在高有機(jī)相溶液中(>40%)會(huì)沉淀，沉淀的蛋白質(zhì)會(huì)阻塞進(jìn)樣器和管路，而且會(huì)吸附待測(cè)物或者污染物。

 

b. 制備樣品所用的化學(xué)品(例如：洗滌劑、鹽) 等會(huì)產(chǎn)生出巨大的不希望出現(xiàn)的離子。樣品凈化富集的方式需要與LC/MS相協(xié)調(diào)。

 

c. 待測(cè)物的溶解度可能是一個(gè)問題。如果樣品在高有機(jī)相溶液中不溶解，在被注入初始的低有機(jī)溶劑的流動(dòng)相中，一些待測(cè)物可能會(huì)在流動(dòng)相中析出，并污染進(jìn)樣器或色譜柱，然后當(dāng)下一個(gè)梯度進(jìn)行時(shí)，它們可能會(huì)再溶解。

 

d. 在進(jìn)樣時(shí)濃度非常大的樣品可能會(huì)污染進(jìn)樣器。在查看樣品中0.1%水平的雜質(zhì)時(shí)，因需要注入足夠多的樣品來查看，這樣的情形就很可能發(fā)生。

 

a. 色譜柱可以表現(xiàn)得如同一個(gè)過濾器，顆粒、沉淀的蛋白質(zhì)、及諸如此類的物質(zhì)都會(huì)停留在色譜柱頭并慢慢地被沖洗下來，這就會(huì)逐漸增加背景離子。

 

b. C₁₈ 分析柱或者Traping去鹽柱將捕獲來自水的疏水性化合物并會(huì)慢慢地富集它們。

  i.被富集的化合物洗脫時(shí)可能作為一個(gè)明顯的峰或者貫穿色譜圖的以類似拖尾的形式出現(xiàn)。

  ii.痕量富集會(huì)導(dǎo)致來自于溶劑或者HPLC系統(tǒng)的污染物的量增大。

  iii.長(zhǎng)時(shí)間的平衡C₁₈色譜柱將富集更多的污染物。

  iv.以低有機(jī)相濃度的等度流動(dòng)相長(zhǎng)時(shí)間沖洗色譜柱也會(huì)富集污染物。色譜柱應(yīng)該用高有機(jī)相的溶液進(jìn)行周期性的清洗。

 

a.PEEK 是一種塑料的聚合物。很多疏水性的化合物 (如類固醇) 可能吸附在上面，而當(dāng)它們洗脫下來時(shí)，會(huì)形成污染物。

 

b. 石英毛細(xì)管路具有活性離子的表面，某些物質(zhì)（例如一些蛋白質(zhì)以及多肽）會(huì)粘附到石英上。那些能夠粘附在玻璃表面的物質(zhì)將都會(huì)粘附在石英毛細(xì)管上。當(dāng)它們被洗脫下來時(shí)，它們將形成污染物。

 

7.HPLC 系統(tǒng) – 在使用前，應(yīng)進(jìn)行清洗并測(cè)試污染物。