Matthew A. Lauber、 Stephan M. Koza 和 Kenneth J. Fountain

目的
證明ACQUITY UPLC®M-Class系統(tǒng)和配套的色譜柱進行微升級2D-RP/ RP肽段色譜的性能和重現(xiàn)性。

背景信息
微升級LC-MS方法在蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用。近來此方法作為Elisa免疫分析的互補技術(shù)，在分析生物藥品中殘留宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)（HCP）上也得到了關(guān)注和應(yīng)用。采用如300 µm窄內(nèi)徑色譜柱能夠從相對少量的樣品中獲得豐富的信息。同時，在此類工作中需要進行高峰容量的肽段分離，因為更高的分離效率才能更容易檢出待測物。

通過多維色譜可以提高肽段分析的峰容量，二維正交的色譜分離方法相結(jié)合可提供更好的分離能力。反相/反相（2D-RP/ RP）二維色譜具有特殊的優(yōu)勢，通過使用具有卓越的化學(xué)穩(wěn)定性和機械穩(wěn)定性的亞乙基橋雜化硅膠顆粒固定相（BEH Technology™），第一維進行高pH反相分離，隨后經(jīng)過在線富集后得肽段混合物在亞2 µm顆粒的分析柱進行第二維低pH反相梯度分離（具體操作請參考以前的應(yīng)用資料）。

使用配置2D-RP/RP功能的ACQUITY M-Class系統(tǒng)和配套的色譜柱進行復(fù)雜肽段分析，峰容量更高，重現(xiàn)性更好。

在本簡報中，我們通過使用ACQUITY UPLC M-Class系統(tǒng)和ACQUITY UPLC M-Class 300 μm內(nèi)徑的分析柱，進一步拓展了此技術(shù)的應(yīng)用和性能。通過測試不同色譜柱組和使用壽命可以看到，此系統(tǒng)不僅具有卓越的分離能力，還實現(xiàn)了絕佳的重現(xiàn)性和可靠性。使用ACQUITY UPLC M-Class系統(tǒng)和色譜柱的2D RP/RP在線二維色譜分離將是一種進行復(fù)雜樣品研究肽段混合物如殘留宿主細(xì)胞蛋白的理想方法，峰容量高，性能穩(wěn)定可靠。

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