琛航C18色譜柱及C18色譜柱選柱技巧
液相色譜中使用C18柱的反相色譜法以生物體相關物質為分析對象,能夠滿足主要研究領域的需要,使用釵惴。诊勶将对手C∩掀放品倍嗟?lt;/SPAN>C18柱和本公司的C18柱作下簡單介紹,以及選柱的一些小技巧。
如下圖所示,這是C18柱總體的鍵合思路。將具有烷基鏈的硅烷化劑與硅膠表面的硅醇基反應,因為使用了共價鍵和的方式將烷基鏈緊緊固定在硅膠表面,所以烷基鏈不會被流動相沖洗掉,作為色譜固定相穩(wěn)定發(fā)揮著作用。
使用硅烷偶聯劑(Silane Coupler)導入C18基團
這張圖描述的C18填料的合成過程看似簡單,但實際上固相與液相之間的反應比液相之間的反應更難控制。與一般化學品相比,對色譜填料再現性的要求也會高很多。如果實際使用的原料和反應條件稍有差別,最終產品的分離特性將會有很大改變。這種變化,隨目的不同或者成為缺點,或者也可能成為優(yōu)點。但是,如果不具有良好再現性,在實際應用中就不能被采用。這樣,在市場上就出現了數百種具有不同分離選擇特性的C18色譜柱。
下圖為關于填料的合成進一步詳細說明,市場上的商品大多分為如下兩個步驟進行合成。
填料的合成
首先,如剛才介紹的,將C18基團導入到硅膠表面。接下來進行第二步反應,將小分子試劑導入到第一步殘留的硅醇基上,此過程被稱為封尾。通過封尾,盡可能地減少原料硅膠的影響,確保與硅膠表面有較強相互作用的化合物的分離效果。另外,通過此步驟,能夠比較容易的確保產品性能的再現性。不受原料硅膠自身特性影響,提供性能穩(wěn)定的商品是廠家永恒的課題。另外,最近作為硅膠的替代物,含有機物的原料也在商品化并在出售,但是,這樣的原料還沒有超過硅膠,大半的商品仍然是以硅膠為原料。
到這里我們可以簡單猜測出造成C18鍵合型填料差別化的主要原因:
1、原料硅膠不僅在細孔徑、粒徑、表面積等幾何學性質上有差別,而且其化學性質也有不同。
2、與烷基反應的硅醇基也有一官能性,二官能性和三官能性之分。并且,隨反應條件不同,產品的最終性質也會有顯著差別,如下:
殘留硅醇基的種類和性質
3、各公司色譜柱封尾反應的差異也是造成色譜柱性能差異的重大因素,而封尾方法也是作為各公司機密的存在。
以上這三點原因所造成色譜柱性能結果可以概括為以下七點:
a. 色譜柱理論塔板數,使用壽命;
b. 同批柱子重現性;
c. 使用LC-MS觀察到的色譜柱流失;
d. 對化合物的保留能力;
e. 對酸中性化合物的峰形;
f. 對極性(堿性)化合物的峰形;
g. 對配位化合物的峰形。
結合以上7點,這里我對琛航公司主要的幾款C18柱作下簡單評價(一般來說a至e這5點是我們公司對色譜柱的基本要求,基本構不成問題)。
Comasil C18
超高的載碳量,超低的金屬離子含量是其突出優(yōu)點,前者保證了色譜柱較強的保留能力與分離能力,后者保證了對配位化合物的良好峰形,同時金屬離子含量低也使得殘余硅羥基的pH較一般色譜柱大,因而有更好的惰性,其衍生產品Comasil BDS C18更是檢測極性(堿性)化合物的首選。
Comatex C18
與Comasil類似的分離分析能力,但較低的柱壓,超長的使用壽命是其突出優(yōu)點,其衍生產品Comatex C18-AQ對親水型的化合物有較好的保留能力和特殊的選擇性。
Inertex C18
較Comasil,Comatex僅僅略低的載碳量,卻大大降低了化合物的保留時間,非常適合用于強保留化合物的分析,例如人參皂苷,黃芪甲苷之類疏水性非常好的中藥分析。同時Inertex使用的硅膠顆粒大小分布范圍非常小,因而較一般色譜柱有更低的柱壓,大大保證了其使用壽命,這是其突出優(yōu)點。
本公司主要的3款色譜柱就介紹到這,一句話總結就是市場上沒有任何一根色譜柱可以涵蓋所有的應用,具體應用還得具體分析,實事求是是化學分析工作的基本要求。