利用沃特世(Waters®)ACQUITY UPC²™系統(tǒng)，成功地將測(cè)定甲苯磺丁脲藥物含量的美國(guó)藥典正相HPLC方法轉(zhuǎn)換為超臨界流體色譜方法。

 

超臨界液體色譜(SFC)是一種正相色譜分離技術(shù)，其使用CO2作為主要流動(dòng)相，通常使用極性溶劑(如MeOH)作為改性劑。由于SFC的原理與HPLC的原理相似，因此，目前的方法應(yīng)該能夠轉(zhuǎn)換成SFC方法，從而減少溶劑的用量和處理，降低每次分析的成本，同時(shí)增強(qiáng)環(huán)境方面的保護(hù)。轉(zhuǎn)換成SFC的色譜方法必須保持?jǐn)?shù)據(jù)質(zhì)量，而且必須得到與目前正相色譜方法一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。目前，美國(guó)藥典(USP)規(guī)定了含有甲糖寧(苯磺酰胺，CAS # 64-77-7)藥物的正相HPLC方法。利用4.0 x 300 mm的硅膠柱(L3)進(jìn)行等度分離，流速1.5mL/min，流動(dòng)相為475:475:20:15:9的正己烷：水飽和的正己烷溶液：四氫呋喃：冰醋酸的混合溶液，運(yùn)行時(shí)間約為20分鐘。如大多數(shù)藥典中的方法一樣，本方法經(jīng)過(guò)驗(yàn)證且可靠。但是，分析過(guò)程使用

了含有正己烷和四氫呋喃的復(fù)雜流動(dòng)相混合溶劑。出于環(huán)保和成本的原因，許多實(shí)驗(yàn)室都希望杜絕這些溶劑的使用。

 

這種新型的超高效合相色譜(UPC²™)方法得到的數(shù)據(jù)與目前的HPLC方法相當(dāng)，甚至更好，速度是目前的HPLC方法10倍，且消耗的溶劑更少。

 

將甲糖寧與內(nèi)標(biāo)物甲糖寧混合，利用目前USP方法制備和分析樣品。分析結(jié)果與使用ACQUITY UPC2方法得到的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。UPC2方法的條件如下：

 

色譜柱： ACQUITY UPC2 BEH，3.0 x 100 mm，1.7微米

溫 度： 50 °C

流動(dòng)相： 95% CO2:5%甲醇/異丙醇 (1:1)，含 0.2% TFA

流 速： 2.5 mL/min

背 壓： 120 Bar/1740 psi

檢測(cè)器： UV /PDA ，254 nm

 

目前的正相HPLC方法，獲得仍可接受的色譜分離(見(jiàn)圖1)，雖然內(nèi)標(biāo)物色譜峰拖尾嚴(yán)重(拖尾因子1.65)。由于已經(jīng)通過(guò)了所列出的適應(yīng)性標(biāo)準(zhǔn)(重復(fù)進(jìn)樣的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過(guò)2.0%；妥拉磺脲和甲糖寧的分離度R不小于2.0)，因此也沒(méi)有再作進(jìn)一步的改進(jìn)。

由新開(kāi)發(fā)的UPC²方法得到的結(jié)果，同樣符合美國(guó)藥典適應(yīng)性的要求(甲糖寧和妥拉磺脲的保留時(shí)間RSD值分別為1.2%和0.9%，兩個(gè)化合物的面積RSD值小于0.90%，n=6)，保持兩個(gè)目標(biāo)化合物間分離度(R = ~15)的同時(shí)，運(yùn)行時(shí)間大大縮短。內(nèi)標(biāo)物妥拉磺脲拖尾現(xiàn)象得到大大改善(拖尾因子1.2)。需要注意的是，利用UPC2從混合物中分離并檢測(cè)出許多小峰，說(shuō)明了本方法具有很高的分離效率。本例中，每次正相HPLC分析大約使用29mL正己烷和各少于1mL的四氫呋喃和乙醇。相比之下，UPC²方法中每次進(jìn)樣大約使用0.25mL的甲醇和異丙醇。這說(shuō)明，通過(guò)將正相HPLC方法轉(zhuǎn)換為UPC²方法，可以大大地減少有機(jī)溶液的使用。根據(jù)目前的溶劑價(jià)格，每次正相HPLC分析的成本大約是1.40美元，而每次UPC²分析的成本大約是0.01美元，說(shuō)明通過(guò)將正相HPLC方法轉(zhuǎn)換為UPC²方法可以大大地降低成本。

使用ACQUITY UPC²，可以成功地將美國(guó)藥典的HPLC方法轉(zhuǎn)換為UPC²方法。這種新的UPC²方法得到的數(shù)據(jù)與目前的HPLC方法相當(dāng)，甚至更好，速度是目前的HPLC方法的10倍，并且消耗的溶劑更少。我們以更快的速度得到高品質(zhì)的分析數(shù)據(jù)，使實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)率提高，每個(gè)樣本的分析成本降低。對(duì)于希望將目前的正相HPLC方法轉(zhuǎn)化為更高效、更省錢(qián)方法的實(shí)驗(yàn)室而言，ACQUITY UPC²系統(tǒng)是一種理想的解決方案，同時(shí)也增強(qiáng)了健康、安全和環(huán)境方面的保護(hù)。