【預(yù)期用途】

該高靈敏度ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）試劑盒是專門用來(lái)定量檢測(cè)血漿樣本中的胰高血糖素樣肽-1（7-36）[GLP-1（1-36）]和（9-36）[GLP-1(9-36)]的總濃度。哺乳動(dòng)物的GLP-1肽鏈的基本氨基酸序列完全相同，如：小鼠、大鼠、豬、狗、猴、人等。該試劑盒僅適用于科學(xué)研究。

【實(shí)驗(yàn)原理】

該ELISA的設(shè)計(jì)，研發(fā)和生產(chǎn)的目的是對(duì)血清樣品中的活性GLP-1（7-36）和GLP-1(9-36)進(jìn)行定量檢測(cè)。它是基于運(yùn)用兩個(gè)GLP-1特異性抗體與兩個(gè)位點(diǎn)結(jié)合的“雙位點(diǎn)夾心”技術(shù)。

將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、和待測(cè)樣品加入鏈霉親和素包被的微孔板中。隨后，將生物素偶聯(lián)的GLP-1特異抗體和HRP標(biāo)記的GLP-1特異抗體混合物添加到各個(gè)孔中。經(jīng)過(guò)第一個(gè)保溫孵育期，形成了“鏈霉親和素-生物素抗體- GLP-1（7-36）/(9-36)-HRP標(biāo)記抗體”的“雙位點(diǎn)夾心”結(jié)構(gòu)，該復(fù)合體被微孔板的內(nèi)壁吸附住。游離的HRP標(biāo)記抗體和緩沖基質(zhì)則在洗滌過(guò)程中被沖走。微孔板加入過(guò)氧化物酶基質(zhì)（3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺，TMB）并經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的反應(yīng)后，然后用酶標(biāo)儀測(cè)量吸光度。微孔板內(nèi)壁的免疫復(fù)合體與GLP-1（7-36）/(9-36)的連接酶活性與樣本中的總GLP-1數(shù)量成正比。

簡(jiǎn)要實(shí)驗(yàn)步驟

• 在各指定孔中分別添加100µL標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本；
• 在各孔中添加100µL抗體混合物；
• 2-8℃靜置培養(yǎng)20-24小時(shí)；
• 用洗滌緩沖液稀釋液洗凈條帶；
• 在各孔中添加200 µL的TMB基質(zhì)；
• 室溫下靜置20分鐘；
• 添加50 µL終止液；
• 讀取450nm/620nm和450nm/650nm下的吸光度。