抗體選擇指南
瀏覽次數(shù):7202 發(fā)布日期:2011-3-24
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抗體選擇指南
抗體親和層析原理是蛋白 A和蛋白 G對不同來源的IgG的Fc-區(qū)具有高度親和性和特異性。這些蛋白被固定在我們的許多填料上,產(chǎn)生了從腹水、細胞培養(yǎng)上清液和血清中分離IgG和IgG亞類的極好方法。關(guān)于抗體親和純化的全部產(chǎn)品系列,見下頁抗體親和填料和層析柱選購指南。
蛋白A (Protein A) 來源于金黃色葡萄球菌的一個株系,它含有5個可以和抗體IgG分子的Fc段特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)域,可以特異性的和樣品中的抗體分子結(jié)合,而使其他雜蛋白流穿,具有極高的選擇性,通常一步親和層析就可達到超過95%的純度。ProteinA sepharoseCL-4B,是將從金黃色葡萄球菌表達純化出蛋白A通過CNBr的方法偶聯(lián)在sepharose CL-4B的介質(zhì)上,可以純化體液或細胞培養(yǎng)液中的免疫球蛋白。nproteinA sepharose4FF,nprteinA即為天然 (Native ProteinA),表示其在生產(chǎn)過程中沒有引入任何動物來源的組分。rproteinA sepharose4FF,重組的蛋白A (rProtein A),經(jīng)基因工程改造后含有一個C末端半胱氨酸,可以單一位點定向偶聯(lián)于瓊脂糖骨架上,有效降低空間位阻,增加了與IgG 的結(jié)合能力。同時配基在發(fā)酵和純化過程中沒有引用人源的IgG,避免了人源IgG的污染風(fēng)險。rmpProteinA,多位點附著的技術(shù),保證更低的配體的脫落。一步高度純化單抗和多抗。
2005年GE推出了新一代的MabSelect ,是第一個使用高流速瓊脂糖凝膠 ( High flow Agarose) 作為骨架的新型蛋白A層析介質(zhì),專為大規(guī)模抗體純化而設(shè)計。相比傳統(tǒng)Fast Flow填料,高流速瓊脂糖具有高流速高載量,更低的配體脫落,易于清洗與除菌消毒,壽命更長、更經(jīng)濟,適合快速高效的進行抗體生產(chǎn)和放大,已經(jīng)成為治療用單抗純化和放大的標準介質(zhì)。2011年又推出了新產(chǎn)品MabSelect LX,更高的動態(tài)載量60mgMab/ml,更大的降低了成本
蛋白G是G族鏈球菌的一種細胞表面蛋白,是Ⅲ型Fc-受體,與IgG結(jié)合類似于蛋白 A,以非免疫機制結(jié)合。我們提供的是其天然蛋白的白蛋白結(jié)合區(qū)域被基因敲除后在大腸桿菌中表達的重組蛋白形式(HiTrap Protein G HP、Ab SpinTrap、ProteinG Sepharose 4 Fast Flow、GammaBind G Sepharose和GammaBindPlus Sepharose),重組蛋白 G含有兩個Fc結(jié)合區(qū)。也提供預(yù)裝有Protein G SepharoseHigh Performance填料的Ab SpinTrap層析柱,它可以通過離心的方式方便地捕獲和純化單克隆和多克隆抗體。
盡管蛋白A和蛋白G親和填料在許多方面是類似的,但對IgG的特異性卻不同。對一般抗體捕獲蛋白G親和填料是一種很好的選擇,因為它可以結(jié)合廣范圍的真核類生物表達的IgG,并且可以結(jié)合更多的IgG亞型。
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