熒光素酶報(bào)告基因

報(bào)告基因（Reporter Gene）：通常指可編碼某種蛋白或酶，其表達(dá)產(chǎn)物容易被檢測，并且能與內(nèi)源性背景蛋白相區(qū)別的基因，通過它的表達(dá)產(chǎn)物來標(biāo)定目的基因的表達(dá)調(diào)控。
 

二，理想的報(bào)告基因必須具備哪些條件？

1.編碼的表達(dá)產(chǎn)物必須與細(xì)胞內(nèi)源性的所有基因相區(qū)別，編碼產(chǎn)物的活性不受宿主細(xì)胞的干預(yù)。

2.有快速簡便、經(jīng)濟(jì)、靈敏的檢測方法，且重現(xiàn)性好、結(jié)果可靠，測量數(shù)據(jù)應(yīng)該有較寬的線性范圍。

3.細(xì)胞內(nèi)的其他基因產(chǎn)物不會干擾報(bào)告基因產(chǎn)物的檢測，同時(shí)報(bào)告基因的表達(dá)也不改變宿主細(xì)胞的生理功能。
 

三，常用的熒光素酶報(bào)告基因有哪些？

熒光素酶（Luciferase）是自然界中能發(fā)出熒光的酶的統(tǒng)稱。他們可以通過酶促反應(yīng)催化底物產(chǎn)生自發(fā)熒光。熒光素酶因其便于檢測和靈敏度高等特性常做為報(bào)告基因被廣泛用于生化檢測實(shí)驗(yàn)中。

其中應(yīng)用最廣泛的是螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase ）和海腎熒光素酶（Renilla luciferase）。

 

 

熒光素酶最大發(fā)射波長可達(dá)560nm,在體內(nèi)還會紅移，大約是在610nm,具有更好的組織穿透性，適用于動(dòng)物內(nèi)臟較深部位的組織成像；海腎熒光素酶最大發(fā)射波長480nm,產(chǎn)生的藍(lán)光組織穿透能力弱，適用于動(dòng)物淺表組織成像；兩者可分別催化各自的底物發(fā)出不同顏色的熒光，且兩種光吸收波長不同，檢測互不干擾，因此可在同一個(gè)化學(xué)反應(yīng)體系中同時(shí)使用，由此雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)受到廣泛青睞。

了解了什么是報(bào)告基因和熒光素酶后，我們來看看什么是熒光素酶報(bào)告基因。

熒光素酶報(bào)告基因是指以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fireflyluciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。這種報(bào)告系統(tǒng)，是檢測轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動(dòng)子區(qū)DNA相互作用的一種檢測方法。分單熒光素酶報(bào)告基因和雙熒光素酶報(bào)告基因。

 

如何選擇熒光素酶產(chǎn)品？

我們知道有單熒光素酶報(bào)告基因和雙熒光素酶報(bào)告基因，我們就需要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要構(gòu)建載體，首先我們需要了解自己到底要做什么？清楚的知道我們的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案和目的。

一般來說，雙熒光素酶體系應(yīng)用于：

1.監(jiān)測細(xì)胞數(shù)量（實(shí)驗(yàn)前&實(shí)驗(yàn)后，例如細(xì)胞毒性的影響）
2.評估轉(zhuǎn)染效率，消除組間轉(zhuǎn)染效率的影響

3.分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的特異性

4.穩(wěn)定細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)中需檢測不同因子對穩(wěn)定細(xì)胞系的影響，用對照（雙熒光素酶體系）去檢測可能的細(xì)胞毒性以及對特異性的影響。

單熒光素酶系統(tǒng)則適用于：

1.同一實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行多次檢測分析（活細(xì)胞中監(jiān)測時(shí)間曲線動(dòng)態(tài)分析）。

2.穩(wěn)定細(xì)胞系，轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)效率在穩(wěn)定細(xì)胞系中并不非常重要。