顯微鏡能怎樣看細(xì)菌？

顯微鏡能看細(xì)菌，是大部分人對(duì)顯微鏡的直觀認(rèn)知；把手放在顯微鏡下看細(xì)菌，是大部分小朋友的直覺操作……當(dāng)然，這樣可看不到細(xì)菌，那么顯微鏡應(yīng)該怎么看細(xì)菌呢？今天我們就來(lái)盤盤細(xì)菌鏡檢的方式。
 

 

·常規(guī)細(xì)菌鏡檢方式：生物顯微鏡 + 革蘭氏染色等明場(chǎng)染色
 

生物顯微鏡ML51（左）和ML51-N（右）

 

細(xì)菌和真菌尺寸都非常小，直接觀察非常難看清，因此一般細(xì)菌觀察都需要經(jīng)過(guò)染色，其中最經(jīng)典的方法是革蘭氏染色。
 

革蘭氏染色是使用廣泛的一種細(xì)菌鑒別方法，革蘭氏陽(yáng)性菌染色后呈紫色，陰性菌呈紅色，染色后不僅可以看清細(xì)菌型態(tài)、排列和結(jié)構(gòu)特征，還對(duì)抗生素選擇有指導(dǎo)意義。我們來(lái)給大家看看一些常見的細(xì)菌經(jīng)過(guò)革蘭氏染色后的樣子。
 

這是蠟樣芽孢桿菌，呈紫色桿狀，革蘭氏陽(yáng)性菌，可引起食物中毒、嘔吐。
 

這是肉毒桿菌，總體呈紫色，革蘭氏陽(yáng)性菌，其次極端有陰性反應(yīng)的芽孢，呈紅色，總體形狀看起來(lái)像個(gè)湯匙，會(huì)產(chǎn)生劇毒的肉毒毒素。
 

為了呈現(xiàn)細(xì)菌鞭毛，還有專門的鞭毛染色法，比如Leifson氏鞭毛染色法和Bailey氏鞭毛染色法，可以將鞭毛染成紅色，以便生物顯微鏡觀察。
 

抗酸染色下的桿菌（紅色）
 

革蘭氏染色主要問題是步驟比較繁瑣，如果不需要分辨革蘭氏陽(yáng)性陰性，那么也可以簡(jiǎn)單點(diǎn)用吉姆薩染色或者抗酸染色等方法。另外由于細(xì)菌尺寸很小，用低倍鏡檢容易漏，檢出率不理想，而如果用100X油浸物鏡高倍鏡檢，小批量還能處理，大批量的話效率堪憂。
 

·高效的細(xì)菌/真菌鏡檢：熒光顯微鏡 + 熒光染色

 

熒光顯微鏡下的細(xì)菌

 

為了提升細(xì)菌和真菌的檢出率，很多醫(yī)院目前都已經(jīng)改用了明美的熒光顯微鏡做熒光鏡檢。
 

熒光觀察下的念珠菌（紅色）

 

熒光染色劑可以將細(xì)菌、真菌等目標(biāo)特異性染色，經(jīng)過(guò)熒光顯微鏡激發(fā)觀察，目標(biāo)將會(huì)呈現(xiàn)明亮的熒光反應(yīng)，而背景和其他無(wú)關(guān)目標(biāo)將呈現(xiàn)為暗色到純黑，即便用低倍物鏡也能快速發(fā)現(xiàn)這些熒光反應(yīng)，從而大大提升診斷的速度和準(zhǔn)確性。

不同的熒光染料可以染色不同的細(xì)菌，可以據(jù)此快速判斷是否存在特定種類細(xì)菌，我們來(lái)給大家分享下一些常見的細(xì)菌在熒光顯微鏡下的樣子。

 

大腸桿菌，上廁所不洗手可能會(huì)感染，導(dǎo)致腹瀉。

 

沙門氏菌，生吃雞蛋容易感染，導(dǎo)致食物中毒。
 

結(jié)核桿菌，會(huì)導(dǎo)致結(jié)核病，屬于呼吸道七聯(lián)檢之一，其他還有六種病原體也是用熒光觀察進(jìn)行判定的。
 

新生隱球菌，常見于鴿糞的致病真菌，對(duì)免疫力低的人能造成較大傷害。

 

白念珠菌，也是常見真菌，正常人也會(huì)有少量，免疫力低可能會(huì)失控增殖進(jìn)而致病。

 

·普通人看細(xì)菌的方法：一臺(tái)靠譜顯微鏡 + 四種簡(jiǎn)單方法

 

醫(yī)院用ML51-N看血涂片
 

上面都是科研和醫(yī)療層面常用的細(xì)菌觀察方式，不僅需要比較高預(yù)算的儀器設(shè)備和配套耗材，還需要比較強(qiáng)的專業(yè)技能，那么普通人想看細(xì)菌能怎么做呢？
 

 

首先是選擇一臺(tái)靠譜的顯微鏡。這里要糾正一個(gè)某寶、某多多等電商平臺(tái)的概念誤導(dǎo)，不存在什么“上萬(wàn)倍放大的光學(xué)顯微鏡”。由于光學(xué)限制，一般的顯微鏡放大倍率上限在1000倍左右，也就是100X物鏡搭配10X目鏡，就到頭了，所謂萬(wàn)倍放大只會(huì)讓成像偏暗且模糊，沒有意義。
 

生物顯微鏡ML11
 

常規(guī)的生物顯微鏡，如很多學(xué)校在用的ML11，標(biāo)配4X/10X/40X/100X四種物鏡，可以用40X或者100X看細(xì)菌。正常渠道四個(gè)倍率全齊的新機(jī)肯定要千元以上，低于千元的畫質(zhì)和做工堪憂，不建議買，關(guān)注明美看圖就好了。使用100X油浸物鏡可以看到更豐富的細(xì)菌細(xì)節(jié)，但這種高倍油浸物鏡使用比較難，需要先學(xué)習(xí)、準(zhǔn)備好耗材再操作。
 

吉薩姆染色下的細(xì)菌
 

有靠譜儀器后，下一步就是方法了。首先是經(jīng)典的明場(chǎng)染色，革蘭氏染色耗材比較多，步驟比較繁雜，不建議普通人從這個(gè)方法上手，建議選擇吉薩姆染色，耗材和步驟相對(duì)簡(jiǎn)單，而且染色液也相對(duì)革蘭氏染色液更便宜。

如果不想倒騰染色，也有三種不染色的方法。
 

相襯觀察下的支原體（小黑點(diǎn)）
 

第一種方法是相襯觀察。相襯觀察是適合看未染色的細(xì)胞、細(xì)菌等樣品的科學(xué)方法，它能將樣品厚度差異轉(zhuǎn)化為圖像對(duì)比度，從而勾勒出樣品的型態(tài)。相襯觀察需要專門的相襯物鏡和相襯聚光鏡，倒置顯微鏡通常會(huì)配備這些，正置顯微鏡也能通過(guò)升級(jí)相襯物鏡和相襯聚光鏡實(shí)現(xiàn)，但相襯套裝通常比較貴。

 

暗場(chǎng)下的血紅細(xì)胞
 

第二種方法是暗場(chǎng)觀察。暗場(chǎng)觀察利用的是丁達(dá)爾效應(yīng)，就是陽(yáng)光斜照讓灰塵都清晰可見的那種現(xiàn)象，它可以形成黑背景、亮樣品的高對(duì)比度圖像。暗場(chǎng)觀察可以通過(guò)簡(jiǎn)易暗場(chǎng)聚光鏡實(shí)現(xiàn)，只需在聚光鏡下安裝暗場(chǎng)環(huán)，然后把聚光鏡調(diào)到最高位置觀察即可，ML31等生物顯微鏡有標(biāo)配的暗場(chǎng)環(huán)可以選購(gòu)。

 

斜照明下的酵母菌

 

最后一種方法是斜照明觀察。這種方法可以讓透明樣品形成強(qiáng)立體感，但會(huì)形成明顯的色差（紫邊、彩色邊），同時(shí)畫面亮度會(huì)不均勻。生物顯微鏡可以0成本體驗(yàn)，方法很簡(jiǎn)單，直接把手伸到阿貝聚光鏡底部，將大部分光照遮住，留下邊緣一條縫，一邊觀察一邊調(diào)整手遮的位置和方向，直到你感覺效果最好。明美體視顯微鏡MZX100可調(diào)角度透射式底座就是利用斜照明技術(shù)，可以用于觀察透明的卵母細(xì)胞等樣品。

 

總結(jié)：用顯微鏡看細(xì)菌還真不是簡(jiǎn)單操作，需要成像質(zhì)量好的生物顯微鏡或熒光顯微鏡，方法包括革蘭氏染色等明場(chǎng)染色、FITC-D-Lys等熒光染色、相襯觀察、暗場(chǎng)觀察和斜照明觀察。對(duì)于大型醫(yī)院等機(jī)構(gòu)，MF31-M熒光生物顯微鏡還是很好的選擇，快捷高效；其他機(jī)構(gòu)可以考慮ML31/ML11生物顯微鏡搭配革蘭氏染色等明場(chǎng)染色；簡(jiǎn)易暗場(chǎng)和斜照明技術(shù)要求和成本要求相對(duì)低，但效果也相對(duì)難調(diào)好，只建議普通用戶嘗試。

 

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