臨近開學(xué)，
我司技術(shù)支持
（兼心理輔導(dǎo)師）
還會經(jīng)常收到這樣焦慮的問題：
“ 老si，你好，
如何才能收獲一盤漂亮的細(xì)胞呢？
為啥別人家的細(xì)胞養(yǎng)得那么好呢，
我的就一言難盡呢”

養(yǎng)出漂亮細(xì)胞 這個事兒本就說來話長~
前幾期話題，我們給大家講過
細(xì)胞貼壁、老化、成團(tuán)、
凍存、復(fù)蘇、污染等問題 。
這次小編又整理了一遍，
先看看這些基本點是否都做好了
 

絕對的無菌意識
1. 細(xì)胞剛拿到手最好先做一下支原體檢測，發(fā)現(xiàn)有污染迅速處理掉。
2. 嚴(yán)格無菌操作，BI也提供Pharmacidal噴壺，有效預(yù)防真菌（和孢子），細(xì)菌（和孢子），支原體和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生長和污染。
3. 真的不要和別人共用試劑耗材，自己準(zhǔn)備一套！
4. 水浴鍋很臟，可用BI Aquaguard-1 消毒水盤，效果非常好。
5. 最好是同一時間只有一個人在細(xì)胞房養(yǎng)細(xì)胞。

用好培養(yǎng)基和血清
1. 養(yǎng)細(xì)胞之前，就要先了解細(xì)胞的來源、種類、名稱，查閱一定量的文獻(xiàn)，確定所需培養(yǎng)基種類及是否需要添加特殊成分。
2. 血清主要功能是補(bǔ)充細(xì)胞生長因子，提供細(xì)胞生長所需的蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、不同細(xì)胞對生長因子的要求也不一樣。血清替代物取代血清補(bǔ)充生長因子和蛋白質(zhì)，但不一定是最適合細(xì)胞的，因此使用時要注意，避免引起細(xì)胞分化或老化。
3. 這里我們順便說一下常見的血清沉淀：血清沉淀是血清纖維的凝集，不影響細(xì)胞生長，不必驚慌！我們建議2000rpm離心5min取上清即可，并不影響血清質(zhì)量。
4. 如果細(xì)胞活力差，可增加血清濃度到20%， 給細(xì)胞較多的生長因子，等細(xì)胞長起來再降回原來的濃度。
 

了解細(xì)胞生長習(xí)性 
不同的細(xì)胞生長習(xí)性不同，了解細(xì)胞生長習(xí)性，正確計數(shù)，才能掌握好傳代密度。對于一般細(xì)胞株，控制在三天一傳，是比較合適的，細(xì)胞不會太擠也不會太寂寞。但例如癌細(xì)胞，一發(fā)起瘋來半天就可以傳代，不及時換液或擴(kuò)增分分鐘會餓死或擠死。
所以剛開始接觸一款細(xì)胞，要勤觀察，及時掌握它的生長情況。掌握細(xì)胞的生長節(jié)奏之后可以變成一天一看或兩天三看，畢竟太頻繁的把它從培養(yǎng)箱里拿出來也不太好。
 

胰酶消化程度是要害
消化一定程度上是對細(xì)胞的一種折磨，在使用胰酶（Trypsins）細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差，做流式時的CD Marker 也可能會下降。

對大部分細(xì)胞消化來說，可以在消化到差不多快要脫落的時候，移除大部分胰酶，然后直接加新鮮的培養(yǎng)基將細(xì)胞吹打下來，省去離心步驟。殘余的胰酶含量很低，所以不會對細(xì)胞產(chǎn)生任何影響。
對于難消化的細(xì)胞，如HCT15, LS411和KM12，用不含Ca²⁺、Mg²⁺的PBS洗滌一次后，加入稍微多一點胰酶，置37ºC徹底消化(一般為幾分鐘)至脫落（一晃細(xì)胞就掉下來），然后再加含血清的培養(yǎng)基終止胰酶反應(yīng)、離心 (若是無血清培養(yǎng)基，需改加胰酶抑制劑)。這么做的道理是，細(xì)胞消化不徹底，勢必會增加吹打輔助脫落的次數(shù)，而吹打次數(shù)越多，細(xì)胞活性越差。
 

培養(yǎng)瓶的選擇
一般，生長速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài)，那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好；生長速度快的細(xì)胞，用玻璃瓶培養(yǎng)的效果會更好。因此，對于同一種細(xì)胞，在其生長速度慢的時候（比如細(xì)胞剛復(fù)蘇時或者原代培養(yǎng)），塑料瓶會好一點；而在其生長旺盛的時候，玻璃瓶則相對會好一點。
 

細(xì)胞嬌弱，想要成功地養(yǎng)好細(xì)胞，需要時刻惦記它，及時觀察，出現(xiàn)意外，及時處理，才能收獲一盤漂亮的細(xì)胞。若仍有疑問，建議回顧往期文章或聯(lián)系我們

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