重要通知：電轉(zhuǎn)染小課堂開課啦

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重要的事情說三遍

                                大家快趕緊關(guān)注

從本期開始將分享電轉(zhuǎn)染方面的知識(shí)以及如何優(yōu)化電轉(zhuǎn)參數(shù)

Part 1  什么是電轉(zhuǎn)？

電轉(zhuǎn)即電穿孔，是一種有效的非病毒介導(dǎo)方法，可以將基因或其他分子高效地導(dǎo)入原核生物或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中。通過這種方法導(dǎo)入目的基因可以建立一個(gè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，以此來研究蛋白質(zhì)表達(dá)，或可以導(dǎo)入siRNA來敲除或“沉默”基因，同時(shí)也可以通過電轉(zhuǎn)方法來進(jìn)行基因靶向和功能研究。

Part 2  電穿孔技術(shù)是如何將外源物質(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞中的？

電穿孔儀利用直流電脈沖瞬時(shí)電擊細(xì)胞，增大細(xì)胞膜通透性或使細(xì)胞膜形成小孔，從而使小分子物質(zhì)，如染料、寡核苷酸、肽等物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞。當(dāng)直流電場(chǎng)去除掉，細(xì)胞膜可恢復(fù)原來的狀態(tài)。

電轉(zhuǎn)染的方法較化學(xué)法、脂質(zhì)體法、和病毒法具有效率高、費(fèi)時(shí)少、成本低、無細(xì)胞毒性等特點(diǎn)，因而被廣泛采用。但是電擊過大會(huì)造成細(xì)胞死亡，而電擊不足會(huì)造成轉(zhuǎn)染效率低，所以我們?cè)谶M(jìn)行電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)之前，需要對(duì)轉(zhuǎn)染相關(guān)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，以使轉(zhuǎn)染效率最大化。

Part 3 如何評(píng)估轉(zhuǎn)染效果？

我們一般用轉(zhuǎn)染效率和存活率評(píng)估轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的效果。轉(zhuǎn)染效率可以用β-半乳糖苷酶測(cè)定法/氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶測(cè)定法/綠色熒光蛋白法/流式細(xì)胞儀篩選法測(cè)定。細(xì)胞存活率可以用流式細(xì)胞儀篩選法/臺(tái)酚藍(lán)染色法測(cè)定。

轉(zhuǎn)染效率=轉(zhuǎn)染的細(xì)胞數(shù)/活的細(xì)胞數(shù)

細(xì)胞存活率=活的細(xì)胞數(shù)/總的細(xì)胞數(shù)

進(jìn)行電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，增加場(chǎng)強(qiáng)，轉(zhuǎn)染效率會(huì)增加，但是細(xì)胞存活率會(huì)降低，因此必須優(yōu)化電參數(shù)，以尋求轉(zhuǎn)染效率和存活率之間的平衡點(diǎn)。

下期預(yù)告：電轉(zhuǎn)染小課堂之如何選擇波形？

自從1938年BTX推出第一臺(tái)商用電穿孔儀以來，BTX一直處于電穿孔技術(shù)的最前沿，一直致力于為各種細(xì)胞和組織類型提供完整的轉(zhuǎn)染解決方案，包括真核生物，原核生物，體內(nèi)組織，卵內(nèi)，子宮內(nèi)，貼壁和懸浮培養(yǎng)，植物細(xì)胞，皮膚和肌肉免疫。除電穿孔儀外，BTX還為各種應(yīng)用提供和研發(fā)專業(yè)的電極。北京德泉興業(yè)商貿(mào)有限公司為BTX在北京和東三省地區(qū)的一級(jí)代理。歡迎致電聯(lián)系我們。