老子說:治大國如烹小鮮。
網(wǎng)友說:待細(xì)胞如養(yǎng)熊貓。
細(xì)胞的生命極其脆弱
消化一定程度上是對它們的一種折磨
所以做好細(xì)胞消化,
善待你的細(xì)胞們
一些細(xì)節(jié)要注意
在使用胰酶(Trypsins)細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。
胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長,否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差,做流式時的CD Marker 也可能會下降。
細(xì)胞消化心得
對大部分細(xì)胞消化來說,可以在消化到差不多快要脫落的時候,移除大部分胰酶,然后直接加新鮮的培養(yǎng)基將細(xì)胞吹打下來,省去離心步驟。殘余的胰酶含量很低,所以不會對細(xì)胞產(chǎn)生任何影響。
對于難消化的細(xì)胞,如HCT15, LS411和KM12,用不含Ca2+,Mg2+的PBS洗滌一次后,加入稍微多一點胰酶,置37ºC徹底消化(一般為幾分鐘)至脫落(一晃細(xì)胞就掉下來),然后再加培養(yǎng)基終止胰酶反應(yīng)、離心 (若是無血清培養(yǎng)基,需改加胰酶抑制劑)。這么做的道理是,細(xì)胞消化不徹底,勢必會增加吹打輔助脫落的次數(shù),而吹打次數(shù)越多,細(xì)胞活性越差。
正確選擇細(xì)胞消化試劑
BI提供動物來源的傳統(tǒng)胰酶及基因工程生產(chǎn)的重組胰蛋白酶。
動物胰酶普遍用于血清培養(yǎng),不同的細(xì)胞加入胰酶的成分和濃度不一樣。貼壁不牢和半貼壁細(xì)胞盡量使用濃度0.05%不含EDTA的胰酶且不需要放在培養(yǎng)箱孵育,這樣易于控制,對細(xì)胞的傷害也降到最低。對于難消化的細(xì)胞就需要使用含EDTA的0.25%的胰酶,而不是無限的延長消化時間。
EDTA有什么作用呢?許多人不用胰酶,只用EDTA,或者用胰酶/EDTA聯(lián)合作用。胰酶切割ECM負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白,而EDTA通過螯合Ca2+,抑制Integrin的貼壁活性,所以EDTA的作用更加溫和。
重組胰酶用于無血清培養(yǎng)。重組胰酶具有與動物源性胰蛋白酶相同的酶學(xué)性質(zhì),但是不含任何動物源成分,可替代胰蛋白酶使用。
BI生產(chǎn)的重組胰酶Recombinant Trypsin EDTA Solution ,堪稱傳統(tǒng)胰酶的完美替代者。無雜酶,無外源性或內(nèi)源性病毒污染,無PMSF、EDTA等任何蛋白酶抑制劑,較傳統(tǒng)的胰酶使用方便,在細(xì)胞培養(yǎng)實驗中減少了很多不必要的操作,細(xì)胞培養(yǎng)效果大大提高了。
BI Trypsin EDTA Solution A BI Recombinant TrypsinEDTA Solution
表格為BI提供的細(xì)胞消化相關(guān)產(chǎn)品信息,可供選擇參考
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