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3種常用基因功能驗正方法簡述

瀏覽次數(shù):4101 發(fā)布日期:2018-11-30  來源:http://www.fitgene.com/news/hangyenews/2018/1029/415.html
科研人員在分析項目的過程中,碰到這樣的問題:通過各種手段(選擇清除分析、比較基因組學分析、轉(zhuǎn)錄組分析)獲得的行駛某種功能的某基因,如果進行實驗的驗正呢?一般分為:基因上調(diào)(基因轉(zhuǎn)染法)、基因下調(diào)(基因干擾法)后看蛋白表達水平、細胞功能改變、在體動物模型中相關(guān)功能的變化等。
 

相信大家也有人有這樣的疑惑,輝駿生物就以上問題進行有針對性的收集了如下的資料,希望可以幫助到您。
 

1、 RNA 干擾技術(shù)

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RNA干擾(RNA interference, RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發(fā)的、同源mRNA高效特異性降解的現(xiàn)象。由于使用RNAi技術(shù)可以特異性剔除或關(guān)閉特定基因的表達,所以該技術(shù)已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的治療領(lǐng)域。

簡單的說如果某基因行駛控制花色為紅的功能(舉例),我們利用RNA干擾技術(shù)將這個基因轉(zhuǎn)錄的mRNA 降解掉,然后看花色的變化,如果不為紅,說明這個基因的確有這個作用。

 

2、 基因敲除技術(shù)

輝駿生物基因敲除技術(shù)

基因敲除是自80年代末以來發(fā)展起來的一種新型分子生物學技術(shù),是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失的技術(shù)。通常意義上的基因敲除主要是應(yīng)用DNA同源重組原理,用設(shè)計的同源片段替代靶基因片段,從而達到基因敲除的目的。隨著基因敲除技術(shù)的發(fā)展,除了同源重組外,新的原理和技術(shù)也逐漸被應(yīng)用,比較成功的有基因的插入突變和iRNA,它們同樣可以達到基因敲除的目的。

 

3、 酵母雙雜交


酵母雙雜交

酵母雙雜交系統(tǒng)是將待研究的兩種蛋白質(zhì)的基因分別克隆到酵母表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄激活因子(如GAL4等)的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域基因和轉(zhuǎn)錄激活因子(如GAL4等)激活結(jié)構(gòu)域基因,構(gòu)建成融合表達載體,從表達產(chǎn)物分析兩種蛋白質(zhì)相互作用的系統(tǒng)。
 

由于蛋白質(zhì)直接互作是蛋白質(zhì)發(fā)揮調(diào)控作用的重要方式,如果要研究某個基因行駛某功能,可以將這個基因和靶基因都整合到酵母中進行互作研究,從而分析其功能。


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