組織硫化氫含量比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

組織硫化氫含量比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)堿性苦味酸與肌酐反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物所呈現(xiàn)的吸光峰值的變化，即采用比色法來(lái)測(cè)定樣品中硫化氫含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良亞甲基藍(lán)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種人體、動(dòng)物組織裂解樣品等硫化氫水平檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

硫化氫（hydrogen sulfide；H2S）是一種自然發(fā)生的，具有腐蝕性和可燃性，不穩(wěn)定的易被氧化的無(wú)色氣體，為半胱氨酸脫硫（desulfuration）代謝產(chǎn)物，是第三個(gè)生理性氣體信使分子（messenger molecule）或氣體傳導(dǎo)分子（gasotransmitter），存在于腦、心臟、肺、肝、小腸、胰腺以及海綿體（cavernosum）組織等，其中腦組織含量較低，腎組織含量較高。神經(jīng)系統(tǒng)的胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）和心血管系統(tǒng)的胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine γ-lyase；CGL）是參與內(nèi)源性硫化氫生成的主要成員。一旦機(jī)體缺氧，硫化氫含量即增高。硫化氫旨在調(diào)節(jié)組織內(nèi)含硫氨基酸的水平，具有心血管系統(tǒng)的生理功能和病理生理調(diào)節(jié)作用，例如誘導(dǎo)血管平滑肌松弛，血管擴(kuò)張（vasodilation），致血壓下降，以及促炎性作用。同時(shí)硫化氫具有毒性作用，會(huì)造成嗅覺(jué)神經(jīng)迅速癱瘓，抑制細(xì)胞色素C氧化酶，增加線粒體膜通道孔開(kāi)放，引起心臟、小腸、生殖系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)平滑肌過(guò)度松弛，而產(chǎn)生器官損傷、低血壓、心動(dòng)過(guò)緩（bradycardia）等癥狀。在自然環(huán)境中，硫化氫是硫循環(huán)（sulfur cycle）的主要中間產(chǎn)物，包括有機(jī)硫化物的礦物化或分解、微生物的同化作用，以及氧化還原。作為化學(xué)窒息性（asphyxiant）氣體，硫化氫對(duì)于魚(yú)類和其它水生動(dòng)物具有毒性作用，同時(shí)也是細(xì)菌污染的標(biāo)志。使用醋酸鋅（zinc acetate）在堿性條件下，捕獲硫化氫，形成穩(wěn)定的硫化鋅沉淀；在酸性條件下，溶解的硫化鋅與催化劑對(duì)氨基二甲基苯胺（N,N-dimethyl-p-phenylenediamine）和氯化鐵（ferric chloride）反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色的亞甲基藍(lán)（methylene blue），通過(guò)其終點(diǎn)吸收峰值的變化（670nm波長(zhǎng)），來(lái)定量分析硫化氫的含量。                      

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A） 毫升
穩(wěn)定液（Reagent B） 毫升
去干擾液（Reagent C） 毫升
反應(yīng)液（Reagent D）   毫升
顯色液（Reagent E）   毫升
標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）   毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)    1份

保存方式

保存反應(yīng)液（Reagent D）和GENMED標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在在4℃冰箱里；反應(yīng)液（Reagent D）避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器
15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
DOUNCE勻漿器：用于裂解組織細(xì)胞
微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作
比色皿：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

樣品準(zhǔn)備

• 手術(shù)取出動(dòng)物組織，并秤重以確定200毫克組織重量  
• （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
• 即刻用刀片切碎組織
• 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
• 加入預(yù)冷的xx毫升清理液（Reagent A）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約40至80下） 
• 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管
• 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為10000g
• 移取500微升到新的1.5毫升離心管
• 加入xx微升穩(wěn)定液（Reagent B），混勻
• 放在冰槽里待測(cè)（注意：須1周內(nèi)使用）

標(biāo)準(zhǔn)樣品準(zhǔn)備

• 移取xx微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）到新的1.5毫升離心管
• 加入xx微升穩(wěn)定液（Reagent B），混勻
• 放在冰槽里待測(cè)

測(cè)定準(zhǔn)備

• 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品，置于冰槽里
• 設(shè)定好分光光度儀：波長(zhǎng)670nm，并置零

樣品測(cè)定

• 移取xx微升去干擾液（Reagent C）到上述待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)樣品管里，混勻
• 加入xx微升反應(yīng)液（Reagent D）
• 加入xx微升顯色液（Reagent E），混勻
• 室溫下孵育20分鐘
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心3分鐘，速度為5000g
• 移取1毫升上清液到比色皿
• 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)，獲得待測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品讀數(shù)

四、計(jì)算樣品濃度

轉(zhuǎn)化為組織實(shí)際硫化氫含量

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為20次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)樣品
• 本產(chǎn)品檢測(cè)范圍在0.1毫克/升（10微摩爾/升）至8.5毫克/升（250微摩爾/升）
• 操作時(shí)，須戴手套
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 系統(tǒng)操作過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定只需1次
• 試劑出現(xiàn)沉淀可以離心去除后檢測(cè)
• 測(cè)定值由低到高變化
• 用戶可以使用664nm至670nm波長(zhǎng)范圍的任一波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)
• 比色測(cè)定后，比色皿須清洗徹底
• 如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低，可以調(diào)整樣品量
• 樣品中碘（iodine）大于2毫克/升、硫代硫酸鹽（thiosulfate）或亞硫酸鹽（sulfite）大于10毫克/升、氰亞鐵酸鹽等可能干擾檢測(cè)
• 硫化氫濃度換算：1毫克/升=29.4微摩爾/升
• 本公司提供系列生化學(xué)檢測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感