豚鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體elisa試劑盒使用說明書

上海滬峰以國(guó)際一流產(chǎn)品為標(biāo)準(zhǔn)，自主研究開發(fā)了一系列應(yīng)用于分子生物學(xué)、蛋白質(zhì)學(xué)、免疫學(xué)研究的相關(guān)產(chǎn)品，全面完善了生產(chǎn)流程和產(chǎn)品質(zhì)量控制體系，同時(shí)利用自身的優(yōu)勢(shì)不斷整合國(guó)內(nèi)外資源，逐步擴(kuò)大產(chǎn)品種類和范圍，代理了美國(guó)R&D、RB、BD、GBD、DSL、BIOO等著名品牌的ELISA試劑盒，力爭(zhēng)成為生物技術(shù)和食品安全檢測(cè)領(lǐng)域最優(yōu)秀的產(chǎn)品供應(yīng)商。

 

豚鼠elisa試劑盒使用目的：
　　本試劑盒用于測(cè)定豚鼠 血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR)含量。

實(shí)驗(yàn)原理
　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豚鼠 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR)水平。用純化的豚鼠 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR)，再與HRP標(biāo)記的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豚鼠 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（VEGFR)濃度。
試劑盒組成
1 20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 3ml×1瓶
2 酶標(biāo)試劑 3ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（4800 ng/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×4條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 3ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1個(gè)

標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

豚鼠elisa試劑盒操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2400 ng/L 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1200 ng/L 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
600 ng/L 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
300 ng/L 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150 ng/L 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。