摘要：建立了γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸含量測(cè)定的氣相色譜面積歸一化方法。γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸在樣品處理和色譜條件上是完全一致的，僅是出峰時(shí)間上有差別，經(jīng)精密度、重現(xiàn)性、回收率實(shí)驗(yàn)，γ-亞麻酸RSD分別為1．51 、1、89％和0．98％，二高γ-亞麻酸RSD分別為1．45 、1．15％和0．81 。相關(guān)性分析r值均達(dá)到極顯著水平。用面積歸一化法進(jìn)行γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸含量測(cè)定能夠達(dá)到簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速、誤差小的目的。
關(guān)鍵詞：γ-亞麻酸；二高γ-亞麻酸；氣相色譜法
中圖分類號(hào)：O 657．71 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672—5425(2005)01一OO5O—O3

     合成前列腺素E (Prostaglamdi E )是以月見草油中分離得到的 亞麻酸為前體物質(zhì)[1]。γ-亞麻酸經(jīng)過還原反應(yīng)、磺化反應(yīng)、增碳反應(yīng)、水解反應(yīng)等步驟而合成二高 亞麻酸，然后通過生物合成前列腺素E 。
     高純度的γ-亞麻酸才能合成二高γ-亞麻酸，因此有必要建立一種快速、簡(jiǎn)便測(cè)定γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸的方法為質(zhì)量控制提供保證。目前國(guó)內(nèi)測(cè)定γ-亞麻酸多是采用氣相色譜外標(biāo)或內(nèi)標(biāo)法[2]，對(duì)于二高γ-亞麻酸的檢測(cè)有報(bào)道用紅外光譜法[1]，作者通過實(shí)驗(yàn)確立了采用氣相色譜法的面積歸一化法來計(jì)算γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸的方法。

l 實(shí)驗(yàn)
1．1 儀器與試劑：南京科捷分析儀器有限公司GC5890型氣相色譜儀（毛細(xì)管進(jìn)樣系統(tǒng)，F(xiàn)ID） 水浴鍋；γ-亞麻酸標(biāo)準(zhǔn)品、二高γ-亞麻酸標(biāo)準(zhǔn)品，二高γ-亞麻酸樣品(自行合成)，γ-亞麻酸樣品(從月見草油中富集得到)，K0H，F(xiàn)B3-乙醚，石油醚，甲醇，均為分析純。

1．2 方法
1．2．1 色譜條件：色譜柱：毛細(xì)管柱(30m×0.25mm)，溫度：柱箱230℃，進(jìn)樣口250℃，檢測(cè)器280℃ ；壓力：N₂ 0.5MPa，H₂ 35ml/min，Air400 ml/min
1．2．2 樣品及標(biāo)準(zhǔn)品的處理：取樣品或標(biāo)準(zhǔn)品4滴置于10mL具塞試管中，加入0．5 mol/L 的K0H甲醇溶液2 mL于63℃水浴中皂化20 min，加入BF3-乙醚溶液0．2 mL，63℃水浴中甲酯化5 min，取出冷水冷卻，加入2 mL石油醚，振搖，吸取上層2 L進(jìn)樣，按面積歸一法計(jì)算。

2 結(jié)果與討論
2．1 不同批次γ-亞麻酸、二高γ-亞麻酸樣品和月見草油中γ-亞麻酸峰面積和含量的相關(guān)性實(shí)驗(yàn)
2．1．1 不同批次月見草油γ-亞麻酸和三次包合后γ-亞麻酸峰面積和含量的相關(guān)性經(jīng)相關(guān)分析知不同批次不同含量的月見草油中γ-亞麻酸的峰面積和含量(％)相關(guān)性達(dá)到了極顯著水平(r=0．992)，采用面積歸一化法進(jìn)行γ-亞麻酸含量計(jì)算比較簡(jiǎn)便、快速、誤差也小，原因是該色譜條件下月見草油中的5種脂肪酸完全能夠分開。對(duì)月見草油γ-亞麻酸經(jīng)富集后純度達(dá)90 以上時(shí)，主要是γ-亞油酸和γ-亞麻酸(見圖lb)。對(duì)不同批次富集后的γ-亞麻酸的峰面積和含量(％)分析相關(guān)性也達(dá)到了極顯著水平(r=0．9997)。
2．1．2 不同批次二高γ-亞麻酸峰面積和含量的相關(guān)性分析
樣品二高γ-亞麻酸采用面積歸一化計(jì)算含量時(shí)，峰面積和含量的相關(guān)性達(dá)到了極顯著水平(r=O．9842)，由于二高γ-亞麻酸的合成是從高純度的γ-亞麻酸為起始物，因此也只有兩個(gè)峰，但出峰的時(shí)間上拖后(見圖1c)。
2．2 線性關(guān)系的考察：精密稱取γ-亞麻酸或二高γ-亞麻酸標(biāo)準(zhǔn)品20 mg置于1O mL容量瓶中，按1．2．2方法進(jìn)行處理，精密吸取2 mL石油醚萃取的上清液1．0 L、1．5 L、2．0 L、2．5 L、3．0 L，按l-2．1的色譜條件進(jìn)行色譜分析，結(jié)果見表3。
    表3說明在10～30 g范圍內(nèi)γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸峰面積積分分值和含量成極顯著的相關(guān)性，其r值分別為0．995和0．9997 。
2．3 精密度和重現(xiàn)性考察：精密度考察；精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液(10μg/mL )1μL注入氣相色譜儀連續(xù)5針，記錄峰面積積分值。
    重現(xiàn)性考察：取自制的樣品1μL，重復(fù)5次取樣，記錄峰面積積分值。經(jīng)分析γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸的精密度RSD分別為1．51 和1．45％，重現(xiàn)性RSD分別為1．89 和1．15 。
2．4 回收率的測(cè)定：精密稱取已知含量的樣品適量，精密加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品，按樣品處理操作，進(jìn)樣2 μL，按相關(guān)性所得峰面積和含量的關(guān)系轉(zhuǎn)換成含量。結(jié)果見表4。
    表4結(jié)果說明γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸的平均回收率分別為98．92 和99．44 ，RSD 分別為0．98 和0．81 ，說明樣品處理是可靠的。

3 結(jié)論
(1)對(duì)不同批次不同含量的月見草油中γ-亞麻酸的峰面積和含量的相關(guān)性分析可以看出相關(guān)系數(shù)r=O．992，達(dá)到了極顯著水平，結(jié)合圖譜可知月見草油的脂肪酯主要是硬脂酸、軟脂酸、油酸、亞油酸和一γ-亞麻酸5種脂肪酸，在該色譜條件下，這5種脂肪酸的分離效果較好，因此可以采用面積歸一化法計(jì)算含量。經(jīng)富集后即純度在9O 以上的γ-亞麻酸峰面積和含量的相關(guān)性分析知，r=0．9997，也達(dá)到了極顯著水平，富集后只剩下亞油酸和γ-亞麻酸兩種組分。
(2)對(duì)不同批次的二高γ-亞麻酸的峰面積和含量的相關(guān)分析r=0．9842達(dá)到了極顯著水平，在該色譜條件下也能夠采用面積歸一化法計(jì)算含量，但γ-亞麻酸和二高γ-亞麻酸的差別僅在于出峰時(shí)間上不一致。

 

注：（作者鄭基斌，電話13951984142，QQ：514456548）