細胞增殖是生物體的重要生命特征,細胞以分裂的方式進行增殖。單細胞生物,以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細胞生物,以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的細胞,用來補充體內(nèi)衰老或死亡的細胞。細胞增殖這個過程本身也表達了細胞不同的狀態(tài),比如測定細胞增殖檢測細胞活力判斷細胞健康狀態(tài),可以作為判定藥物的安全性的第一個指標,也是判定癌癥藥物療效的重要依據(jù)。
目前測定細胞增殖的方式分為兩大類:
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傳統(tǒng)的終點法(如CCK8和MTT法)通過化學反應和酶標儀測量OD值來推算細胞濃度,但需要取出部分細胞,增加了實驗步驟和耗時,特別對難培養(yǎng)的細胞是一種負擔。
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活細胞成像技術通過無侵入性監(jiān)測實時記錄細胞狀態(tài),生成增殖曲線,不僅有助于優(yōu)化細胞培養(yǎng)方案,還能幫助判斷最佳給藥時間,極大節(jié)省實驗時間和工作量
下面以口腔癌細胞為例,利用康和達Celloger Pro活細胞成像儀實時拍攝細胞增殖的全過程,代替?zhèn)鹘y(tǒng)的終點檢測方法(如MTT、CCK-8)。一次實驗就能解鎖細胞的動態(tài)奧秘!我們?yōu)槟鷾蕚淞嗽敿毜牟僮髦改,讓實驗更加輕松高效👇
實驗方法:
1. 準備工作
●無菌環(huán)境:確保工作在無菌條件下,使用超凈工作臺。
●培養(yǎng)基:DEME 添加10%胎牛血清(FBS),1%雙抗PIS,如果是其他特殊細胞可根據(jù)細胞類型補充所需的生長因子、抗生素和其他添加劑。
●耗材:6孔板、 1ml移液槍、無菌槍頭、
2. 細胞接種
●細胞計數(shù):使用Facscope細胞計數(shù)儀對細胞進行計數(shù)。
●接種:將細胞懸液以適當?shù)拿芏龋?×10⁴至1×10⁵細胞/ml)接種到培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。
3. 培養(yǎng)
●溫度和CO₂:通常在37°C,5% CO₂的條件下培養(yǎng)細胞。
●觀察:使用Celloger Pro在培養(yǎng)箱內(nèi)實時監(jiān)測細胞狀態(tài),并利用Celloger
®配套的分析軟件分析細胞融合度并制作生長曲線。
*細胞培養(yǎng)是一項技術要求高、細致入微的工作,需嚴格遵循無菌操作規(guī)程以避免污染。
實驗結果:
Celloger
®細胞劃痕的應用實例
請至釘釘文檔查看附件《3,A1(28.463,31.219,22.110)_Normal_BF(1).avi》
Celloger
® Pro 記錄口腔癌細胞20h<10X Image>
實驗分析數(shù)據(jù)
圖1.細胞培養(yǎng)48h后20h內(nèi)口腔癌細胞生長曲線
細胞在57h后細胞鋪滿整個培養(yǎng)皿,在57h后細胞生長會出現(xiàn)疊層,由此判斷傳代的時間最好少于57h,在49h-50h細胞增殖的速率高于50h之后,如果需要用藥物抑制口腔癌細胞,可以在50h之前進行處理,會取得更好的效果。
通過Celloger®活細胞成像儀實時、高清觀測,記錄細胞的每一次分裂和增殖。無需干擾細胞生長環(huán)境,數(shù)據(jù)精準又可靠!
●實時追蹤:捕捉細胞生命的動態(tài)瞬間。
●超低光毒性:守護細胞健康,確保實驗穩(wěn)定性。
●多樣應用:細胞增殖、遷移、甚至藥物篩選!
使用康和達 Celloger
® Pro 進行實時細胞監(jiān)測和分析,提高科研效率。無需將細胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出,即可進行復雜的研究和數(shù)據(jù)分析。在保證實驗質量的同時為您節(jié)約寶貴時間。
●輕松實現(xiàn)實時監(jiān)測
遠程監(jiān)控培養(yǎng)箱內(nèi)的活細胞,不干擾適合細胞培養(yǎng)環(huán)境?梢詫崟r監(jiān)控細胞,也可以利用延時拍攝功能,自動拍攝細胞圖像,只需點擊即可輕松制作延時視頻。
●多孔位延時成像功能
Celloger
® Pro 通過自動移動的集成相機和固定在平臺的培養(yǎng)耗材和樣本,在多個位點進行細胞成像。這樣確保了細胞的穩(wěn)定環(huán)境,從而提高了圖像質量和研究準確性。
●熒光和明場鏡頭
憑借雙色熒光和明場鏡頭,Celloger
® Pro可以拍攝高質量和高分辨率圖片。
●可更換的物鏡
Celloger
® Pro為用戶提供可更換的物鏡,為研究人員的不同需求提供靈活性。有2X,4X和10X的物鏡供選擇,用戶可以自由切換。
●兼容多種培養(yǎng)容器
Celloger
® Pro 適配多種holder以適用多種不同類型的細胞培養(yǎng)容器,包括孔板、T形瓶、載玻片。
●Celloger
® Pro 應用場景