重組鱟試劑高效替代細菌內毒素檢測中LAL試劑的數(shù)據驗證
一、背景與目的
PyroSmart NextGen®重組鱟試劑是一種基于鱟基因克隆技術開發(fā)的重組級聯(lián)試劑（rCR），旨在提升對特定內毒素的反應性，并減少外部干擾。
本研究旨在全面評估PyroSmart NextGen®重組鱟試劑與LAL試劑在細菌內毒素檢測中的等效性，并驗證其在平板讀數(shù)器和試管讀數(shù)器方法中的性能表現(xiàn)。
二、分析性能驗證
根據ICH Q2指南和USP<1225>標準，對PyroSmart NextGen®重組鱟試劑在試管讀數(shù)器中的性能進行了全面評估，結果顯示其在準確度、精確度、特異性、定量限（確定為0.001EU/mL，試劑靈敏度相較于平板讀數(shù)器檢測法提高了5倍）、線性和范圍等關鍵參數(shù)上均符合驗收標準（表1）。
這些分析測試結果進一步證實了PyroSmart NextGen®重組鱟試劑作為LAL試劑替代品的分析性能和適用性。
三、等效性測試驗證
采用平板讀數(shù)器和試管讀數(shù)器方法，使用PyroSmart NextGen®重組鱟試劑和兩種LAL試劑對100多個過濾水樣進行等效性測試。通過相對回收率、線性回歸分析和Bland-Altman圖等方法，評估兩種試劑之間的等效性。
●相對回收率：在測試的102個樣本中，91%的平板讀數(shù)器樣品和80%的試管讀數(shù)器樣品的相對回收率結果在50–200%之間（圖1），符合美國藥典最大試劑變異率的標準。
●線性回歸分析：對平板讀數(shù)器與試管讀數(shù)器檢測的樣品分別進行線性回歸比較后，發(fā)現(xiàn)平板讀數(shù)器的線性回歸斜率為0.9873，95%置信區(qū)間為0.8779至1.097；而試管讀數(shù)器的斜率為1.073，置信區(qū)間為0.9769至1.170。
兩個讀數(shù)器的斜率均在0.7至1.3的范圍內（圖2），進一步證實了PyroSmart NextGen®重組鱟試劑與LAL試劑在檢測水樣內毒素方面的等效性。
●Bland-Altman圖：在圖3所示的Bland-Altman圖中，平板讀數(shù)器檢測的偏差為-21.43，試管讀數(shù)器的偏差為-64.58，但兩者均有97%的數(shù)據點落在95%的一致性上限和下限（LOA）范圍內。
根據證明等效性的標準，即至少95%的數(shù)據點應位于此區(qū)間內，PyroSmart NextGen®重組鱟試劑與LAL試劑在平板讀數(shù)器和試管讀數(shù)器方法上的比較均達到了等效性的要求。
四、替代試劑開發(fā)與實施的關鍵考量因素
本研究還強調了替代試劑在開發(fā)和實施過程中需要考慮的關鍵因素，如產品質量、風險管理、生產質量管理體系等。這些因素對于確保替代試劑的可靠性、穩(wěn)定性和可持續(xù)性至關重要。
五、結論
PyroSmart NextGen®重組鱟試劑作為一種重組級聯(lián)試劑（rCR），在細菌內毒素檢測中表現(xiàn)出與LAL試劑相當?shù)臋z測性能。其靈敏度更高，且能與多種LAL試劑進行等效分析。
這些結果充分證明了PyroSmart NextGen®重組鱟試劑符合美國藥典通用通告和要求6.30以及美國食品藥品監(jiān)督管理局工業(yè)指南對替代檢測方法的要求，是替代LAL試劑的理想選擇。
