如何通過激光顯微切割改善 DNA 突變分析工作流程
癌癥研究：提取未稀釋的癌組織進(jìn)行DNA突變分析
DNA 突變導(dǎo)致異常蛋白質(zhì)或缺失功能蛋白質(zhì)，這可能導(dǎo)致細(xì)胞不受控制地增殖并變得癌變。為了找到并理解特定癌癥類型的潛在突變，提取純腫瘤材料是極其重要的。這尤其具有挑戰(zhàn)性，特別是當(dāng)只有有限數(shù)量的癌性組織可用時（例如小轉(zhuǎn)移）。激光顯微切割允許提取純粹的癌性組織，而不會用健康細(xì)胞污染您的樣本。DNA 測序?qū)?dǎo)致有效且可重復(fù)的結(jié)果，幫助輕松識別致癌的 DNA 突變，因?yàn)椴粫晃廴镜慕】导?xì)胞掩蓋。
精確到單細(xì)胞的 DNA 變異分析工作流程
徠卡的激光顯微切割系統(tǒng)將通過精確切割您感興趣的細(xì)胞來改善您的工作流程。每一步都在視覺控制下進(jìn)行，并且不會與周圍組織污染。
DNA 分析工作流程 - 步驟
01.樣品準(zhǔn)備
通常，激光顯微切割使用特殊的基于膜的載玻片。LMD的樣本準(zhǔn)備是簡單的，可以從經(jīng)典的組織學(xué)準(zhǔn)備中得出。
石蠟包埋將組織樣本帶入可以切成薄片的狀態(tài)�；蛘撸梢岳美鋬銮衅瑏頊�(zhǔn)備您的載玻片。如果有新鮮的癌組織可用，您應(yīng)該優(yōu)先選擇冷凍切片以保護(hù)核酸不被降解。
我們將為您的應(yīng)用提供合適的LMD載玻片。
02.固定和染色
一般來說，可以使用石蠟切片或冷凍切片。這里我們將概述冷凍切片的使用。
樣本切片應(yīng)在冷凍切片后立即用丙酮、乙醇或乙醇和醋酸的混合物固定和染色。
H&E 是一種常見的組織學(xué)染色，其中蘇木精染色細(xì)胞核，伊紅染色細(xì)胞質(zhì)。
H&E 染色適用于石蠟切片和冷凍切片。
03.可視化和 ROI 定義
徠卡 LMD激光顯微切割系統(tǒng)可以生成自動樣本概覽，便于輕松導(dǎo)航到您的感興趣區(qū)域 (ROI)。
您的 ROI 可以通過 AVC 軟件模塊自動識別和標(biāo)記，或者您可以手動應(yīng)用形狀。
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關(guān)于徠卡 LMD 激光顯微切割系統(tǒng)的更多信息
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關(guān)于徠卡 LMD 激光顯微切割應(yīng)用軟件的更多信息
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激光顯微切割文章與教程
04.激光顯微切割
接下來，定義的感興趣區(qū)域（ROIs）在視覺控制下被激光精確切割，并通過重力直接收集。視覺控制的切除可以防止腫瘤材料與健康細(xì)胞混合，從而扭曲結(jié)果。通過重力收集允許使用標(biāo)準(zhǔn)、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的 耗材，如 PCR 管或 8 條管。
此外，您可以使用“移動和切割”工具直接在飛行中切割樣本，而無需任何預(yù)定義形狀。
我們提供適合您符合需求的LMD激光顯微切割系統(tǒng)。
05.DNA提取
徠卡顯微系統(tǒng)推薦使用高質(zhì)量的 QIAGEN 試劑盒（QIAamp® DNA Micro Kit）用于核酸的制備。
它們可以立即用于下游應(yīng)用，如 PCR、測序、定量實(shí)時 PCR，或者可以在-20°C 下存儲，直到需要時使用。
06.DNA突變分析
DNA 突變分析是通過下一代測序（NGS）進(jìn)行的。
其他技術(shù)如焦磷酸測序或經(jīng)典的 DNA 桑格測序也適用。
典型的研究領(lǐng)域
- Pathology research 病理研究
- Neuroscience 神經(jīng)科學(xué)
- Pharmaceutical research 制藥研究
- Plant research 植物研究
- Epigenetics research 表觀遺傳學(xué)研究
典型的研究領(lǐng)域
- LMD 傳單 – DNA 突變分析
- LMD 應(yīng)用視頻
參考文獻(xiàn)：
1.Shen et al., Nature, 2018, doi: 10.1038/s41586-018-0703-0
2.Makohon-Moore et al., Nature, 2018, doi: 10.1038/s41586-018-0481-8
3.Untch et al., CancerRes, 2018, doi: 10.1158/0008-5472.CAN-17-1925
4.Huang et al. Nanotheranostics (2018)
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