在分子生物學(xué)和生物化學(xué)研究中，理解生物分子之間的動(dòng)態(tài)相互作用對(duì)于揭示其功能與機(jī)理至關(guān)重要。表面等離子體共振（SPR）技術(shù)因其實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)無標(biāo)記監(jiān)測(cè)分子互作，已經(jīng)成為研究這些相互作用的關(guān)鍵工具。Affinité 公司是一家專業(yè)的SPR儀研發(fā)生產(chǎn)企業(yè)，提供多種型號(hào)SPR儀器，可滿足實(shí)驗(yàn)室及現(xiàn)場(chǎng)分析需求。
 

Affinité SPR儀——P4PRO
利物浦大學(xué)和基爾大學(xué)的研究團(tuán)隊(duì)在最新發(fā)表的研究中，基于Affinité 的標(biāo)準(zhǔn)金膜涂層芯片，開發(fā)了一種新的傳感器表面修飾方法，并成功應(yīng)用于Affinité SPR儀，檢測(cè)肝素小分子與蛋白間相互作用。這樣的傳感器表面可以批量制備、保存，進(jìn)一步拓展了Affinité SPR儀器的應(yīng)用。
 

關(guān)鍵詞
肝素，表面等離子體共振，蛋白質(zhì)-多糖相互作用，酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制，生物素化肝素捕獲
 

圖1 OEG 自組裝單層以及隨后捕獲鏈霉親和素和生物素化配體的示意圖

材料與方法
生物素化肝素的制備
研究團(tuán)隊(duì)使用羥胺生物素對(duì)豬腸肝素進(jìn)行了還原端生物素化，這一過程確保了產(chǎn)物的穩(wěn)定性。37°C下反應(yīng)48小時(shí)，去除未反應(yīng)的生物素并更換緩沖液。

傳感器表面修飾與功能化
在傳感器金膜表面修飾硫醇油基乙二醇/生物素硫醇油基乙二醇單分子層，孵育鏈霉親和素，再通過鏈霉親和素捕獲還原端生物素化的肝素。這種方法確保了傳感器表面的高穩(wěn)定性和低非特異性結(jié)合。
 

圖 2 在biotin-OEG/OEG 自組裝單層膜上捕獲鏈霉親和素、固定還原端生物素化的肝素

研究亮點(diǎn)
高效檢測(cè)肝素結(jié)合蛋白
研究團(tuán)隊(duì)通過Affinité SPR儀器成功檢測(cè)了成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF2）與肝素的結(jié)合。這一實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了新型傳感器表面的有效性和穩(wěn)定性。
 

圖 3 FGF2 和 GST-HS3ST3A1 與肝素衍生物的結(jié)合
 

圖 4 可溶性肝素誘導(dǎo)的解離

酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制研究
研究展示了對(duì)肝素硫酸磺基轉(zhuǎn)移酶（HS3ST3A1）競(jìng)爭(zhēng)性的分析，發(fā)現(xiàn)選擇性修飾的肝素衍生物和蘇拉明能夠有效競(jìng)爭(zhēng)酶的糖受體位點(diǎn)。這一發(fā)現(xiàn)有助于深入了解酶對(duì)多糖中硫酸化結(jié)構(gòu)的選擇性。
 

圖 5 肝素衍生物競(jìng)爭(zhēng) HS3STA1 與肝素的結(jié)合

圖 6 蘇拉明競(jìng)爭(zhēng) GST-HS3ST3A1 與肝素的結(jié)合

多功能傳感器
該傳感器表面不僅可以用于肝素，還可以應(yīng)用于研究其他類似的多糖，這為研究許多內(nèi)源性蛋白質(zhì)和病毒與宿主細(xì)胞相互作用提供了新工具。

研究意義
這種生物素功能化表面在生物醫(yī)藥研究中有廣泛的應(yīng)用潛力，特別是在研究蛋白質(zhì)-多糖相互作用、酶抑制劑篩選以及病毒與宿主細(xì)胞相互作用方面。Affinité SPR儀器的應(yīng)用使得現(xiàn)場(chǎng)分析更加便捷，為未來的生物醫(yī)學(xué)研究提供了更多可能性。

Affinité P4PRO分子互作儀
加拿大Affinité Instruments是一家專注于分子互作研究的公司，基于無標(biāo)記、高靈敏、表面等離子共振技術(shù)（SRP技術(shù)）開發(fā)了性價(jià)比極高的個(gè)人型分子互作儀，旨在讓每位科研工作者和實(shí)驗(yàn)室都能夠順利的把分子互作相關(guān)實(shí)驗(yàn)開展起來，助力生物科學(xué)發(fā)展。
 

P4PRO是Affinité Instruments最暢銷的一款分子互作儀，其特點(diǎn)是

• 基于SPR原理，實(shí)時(shí)、無標(biāo)記、檢測(cè)相互作用；
• 搭配先進(jìn)的微流控技術(shù)，實(shí)現(xiàn)高性能和高準(zhǔn)確性；
• 10分鐘內(nèi)完成1個(gè)樣本測(cè)試；
• 一組實(shí)驗(yàn)可獲得結(jié)合特異性、親和力、動(dòng)力學(xué)等數(shù)據(jù)；
• 四通道檢測(cè)，結(jié)合參照通道信號(hào)，可進(jìn)行背景扣除，獲得可信數(shù)據(jù)；
• 儀器穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)單，維護(hù)簡(jiǎn)便；
• 采用注射泵組件，控制精準(zhǔn)，信號(hào)穩(wěn)定；
• 儀器性價(jià)比高，單個(gè)實(shí)驗(yàn)室即可負(fù)擔(dān)；
• Afficoat^TM芯片可減少SPR試驗(yàn)中的非特異性結(jié)合；
• 芯片耗材成本低，大大降低儀器運(yùn)行成本。