作為勤勤懇懇的科研人,想必大家做PCR實(shí)驗(yàn)已經(jīng)非常得心應(yīng)手了,但依舊擺脫不了跑膠失敗,PCR一遍遍做,莫名其妙,也找不到原因。小伙伴關(guān)注引物是不是有問題,試劑是不是不好等因素。PCR擴(kuò)增儀的好壞也是我們常常忽略的一個(gè)點(diǎn),PCR擴(kuò)增儀主要由熱循環(huán)系統(tǒng)組成,而其中最關(guān)鍵的就是半導(dǎo)體導(dǎo)熱模塊和樣品槽。
溫控性能是影響PCR反應(yīng)的關(guān)鍵因素
由PCR原理也可看出,PCR反應(yīng)是不斷升溫和降溫的過程。需要能在變性-退火-延伸這三個(gè)關(guān)鍵步驟進(jìn)行溫度控制。溫度控制涉及溫度準(zhǔn)確性、均一性、升降溫速率、溫度梯度等多個(gè)方面。
溫度準(zhǔn)確性是PCR儀的重要性能指標(biāo)。如果儀器溫度準(zhǔn)確性差,樣品槽的實(shí)際溫度不能達(dá)到設(shè)定溫度,那就無法獲得預(yù)期的擴(kuò)增結(jié)果,即要么擴(kuò)增不出來,要么產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增甚至是錯(cuò)誤擴(kuò)增!
溫度均一性是獲得穩(wěn)定擴(kuò)增的保障。若PCR儀的溫度均一性差,在出現(xiàn)不同擴(kuò)增結(jié)果時(shí)就無法判斷是樣品本身不同造成還是儀器性能不好所導(dǎo)致。
樣品槽材質(zhì)是影響PCR儀溫控性能的關(guān)鍵因素
PCR儀樣品槽的材質(zhì)會(huì)影響上述溫控方面的性能,一旦PCR儀的導(dǎo)熱性能不好,就會(huì)導(dǎo)致PCR的擴(kuò)增效率不行,進(jìn)而影響最終結(jié)果。目前PCR樣品槽主要分為幾種材質(zhì):鋁合金槽、銀質(zhì)槽、鍍金槽等。其中鍍金槽成本最高,但也是性能最好的(艾普拜生物精衛(wèi)自動(dòng)PCR儀-采用鍍金槽),下面我們一起來看看鍍金槽作為成本最高的材質(zhì),優(yōu)勢到底在哪?
其優(yōu)勢主要體現(xiàn)在:
① 優(yōu)異的熱傳導(dǎo)性能:
- 金是一種良好的熱導(dǎo)體,鍍金槽能夠快速且均勻地傳遞熱量,使PCR反應(yīng)體系中的溫度變化更加迅速和準(zhǔn)確。這對(duì)于PCR反應(yīng)中變性、退火、延伸等不同溫度階段的精確切換非常重要,可以提高反應(yīng)的效率和特異性,減少非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)。例如,在一些對(duì)溫度變化要求極高的PCR實(shí)驗(yàn)中,鍍金槽的快速熱傳導(dǎo)性能能夠確保反應(yīng)的順利進(jìn)行。
- 與普通的鋁合金材質(zhì)樣品槽相比,鍍金槽的熱傳導(dǎo)性能更優(yōu),能夠在更短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到設(shè)定的溫度,從而縮短整個(gè)PCR反應(yīng)的時(shí)間,提高實(shí)驗(yàn)的效率。
② 良好的溫度均勻性:在PCR反應(yīng)過程中,溫度的均勻性對(duì)于反應(yīng)結(jié)果的穩(wěn)定性和重復(fù)性至關(guān)重要。鍍金槽的材質(zhì)特性使得熱量能夠在槽內(nèi)均勻分布,確保每個(gè)樣品孔位的溫度基本一致。這樣可以避免因溫度差異導(dǎo)致的部分樣品擴(kuò)增效果不佳或結(jié)果不準(zhǔn)確的問題,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性。
③ 抗腐蝕性強(qiáng):金是一種化學(xué)性質(zhì)非常穩(wěn)定的金屬,具有很強(qiáng)的抗腐蝕性。在PCR實(shí)驗(yàn)過程中,經(jīng)常會(huì)使用各種化學(xué)試劑,如緩沖液、酶等,這些試劑可能會(huì)對(duì)樣品槽產(chǎn)生一定的腐蝕作用。而鍍金槽能夠有效地抵抗這些化學(xué)試劑的侵蝕,保證樣品槽的長期穩(wěn)定性和使用壽命。
④ 表面光滑度高:鍍金層的表面光滑度較高,這有利于樣品的放置和取出,減少樣品在槽內(nèi)的殘留,降低交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí),光滑的表面也便于清潔和維護(hù),保持樣品槽的清潔度,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
想必大家對(duì)普通PCR的熱循環(huán)系統(tǒng)的硬件尤其是樣品槽已經(jīng)有了很深的認(rèn)識(shí)了,相信大家對(duì)于如何選擇合適的PCR儀也已經(jīng)心中有數(shù)。
精衛(wèi)自動(dòng)PCR儀
精衛(wèi)自動(dòng)PCR儀有Kingwell 96、Kingwell 96DW和Kingwell 384三款型號(hào)可選,能夠滿足不同通量的實(shí)驗(yàn)需求。所有型號(hào)均采用鍍金樣品槽,能夠帶來更好的溫控性能和更快的升降溫速度。同時(shí)所有型號(hào)均采用簡潔現(xiàn)代的外觀設(shè)計(jì),搭配10.1英寸彩色觸控屏和智能化操作系統(tǒng),帶來更高效便捷的實(shí)驗(yàn)體驗(yàn)。
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