顯微成像應(yīng)用案例：徠卡多色圖像集錦

瀏覽次數(shù)：335　發(fā)布日期：2024-9-23　來源：徠卡顯微鏡

用徠卡顯微系統(tǒng)儀器拍攝的多圖攝像

熒光多色顯微技術(shù)是多重成像技術(shù)的一個(gè)方面，可在同一實(shí)驗(yàn)中觀察和分析同一樣本中的多種元素--每種元素都標(biāo)記有不同的熒光染料。這不僅能提高實(shí)驗(yàn)效率，還能獲得更可靠、更有意義的結(jié)果，從而了解細(xì)胞和組織內(nèi)的復(fù)雜過程。本圖集展示了使用THUNDER和STELLARIS平臺獲得的標(biāo)有多種熒光探針的樣本圖像。

使用 STELLARIS 共聚焦

平臺進(jìn)行多色成像

STELLARIS共聚焦顯微鏡系列配備了新一代白光激光器（WLL）。搭配Power HyD檢測器，STELLARIS可提供完全自由的光譜。您可以根據(jù)自己的研究需要進(jìn)行多色實(shí)驗(yàn)，而不受儀器的限制。通過使用TauSense工具集，STELLARIS還可以利用熒光染料/蛋白質(zhì)基于生命周期的特性，為多色成像增加一個(gè)新的維度。

用TauSTED對活細(xì)胞中的細(xì)胞骨架和細(xì)胞膜

進(jìn)行成像

使用STELLARIS STED采集的圖像。

TauSTED 775解析了用SiR-tubulin（熒光 - Spyrochrome）標(biāo)記的錯(cuò)綜復(fù)雜的細(xì)胞骨架網(wǎng)絡(luò)，以及用CF594（青色 - Biotium）標(biāo)記的運(yùn)輸囊泡。

內(nèi)吞途徑和線粒體動力學(xué)

使用STELLARIS STED采集的圖像。

用MitoView Green標(biāo)記的線粒體。用CellBright NIR750標(biāo)記的膜泡。使用TauSeparation，根據(jù)與囊泡內(nèi)吞成熟相關(guān)的pH值成熟步驟進(jìn)行壽命成分分離，揭示不同的內(nèi)吞步驟。

用TauSTED對活細(xì)胞中的細(xì)胞骨架和細(xì)胞膜

進(jìn)行成像

使用STELLARIS STED采集的圖像。U2OS細(xì)胞上的活細(xì)胞TauSTED，使用了肌動蛋白（SiR-actin，熒光）、微管（SPY555-tubulin，青色）和膜（CF488A偶聯(lián)WGA，綠色）標(biāo)記。SiR和SPY可從Spirochrome購買。CF染料可從Biotium Inc.比例尺：10 微米。

用TauSTED對活細(xì)胞中的細(xì)胞骨架和細(xì)胞膜進(jìn)行成像。

擬南芥（Arabidopsis thaliana）的根-下胚軸交界處

擬南芥（Arabidopsis thaliana）的根-下胚軸交界處：肌動蛋白（Lifeact-Venus，Era 等人，植物細(xì)胞生理學(xué)，2009年）、葉綠體（內(nèi)源性熒光）和細(xì)胞壁（碘化丙啶）。通過使用基于熒光壽命的信息，可以觀察到肌動蛋白網(wǎng)絡(luò)、細(xì)胞壁和葉綠體的復(fù)雜細(xì)節(jié)。圖片使用TauContrast技術(shù)獲取。樣本由海德堡大學(xué)COS的Melanie Krebs博士提供。

揭示細(xì)胞骨架和線粒體之間的相互作用

用SiR-Actin（657 - 740 納米檢測范圍）、AF750-Tom20（760 - 790 納米）、AF790-Tubulin（810 - 850 納米）標(biāo)記的 Cos-7 細(xì)胞。

左圖：傳統(tǒng)砷化鎵檢測器所見。
右圖：配備Power HyD R檢測器的STELLARIS 8所見。光譜結(jié)果（右）顯示了實(shí)驗(yàn)中使用的熒光團(tuán)的激發(fā)光譜（灰色）和發(fā)射光譜（紅色）。
樣品提供：Jana Döhner 博士和 Urs Ziegler 博士。Urs Ziegler，蘇黎世大學(xué)。

充分利用活細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：更少曝光，更多信息

使用傳統(tǒng)共聚焦顯微鏡對同一樣本中的多個(gè)不同熒光標(biāo)簽進(jìn)行成像時(shí)，通常需要對每個(gè)顏色通道進(jìn)行順序成像，以避免光譜串色而降低圖像質(zhì)量。在動力學(xué)實(shí)驗(yàn)中，這意味著由于獲取每個(gè)時(shí)間點(diǎn)所需的時(shí)間增加，您可能會錯(cuò)過快速的動態(tài)事件。此外，樣品在臺上停留的時(shí)間更長，因此在實(shí)驗(yàn)過程中保持細(xì)胞健康更具挑戰(zhàn)性。下圖是用4種不同的熒光團(tuán)標(biāo)記的活體 HeLa 細(xì)胞拍攝的圖像，用于識別細(xì)胞核、肌動蛋白、微管蛋白和質(zhì)膜。有了STELLARIS，就可以一次性采集所有4個(gè)通道的圖像，而不必對細(xì)胞連續(xù)成像4次。

LAS X Navigator--用于實(shí)驗(yàn)的GPS

上圖：小鼠胚胎（如第 X 頁所示）的201張拼接圖像的詳細(xì)視圖（單張圖像）。
(第 X 頁所示）的細(xì)節(jié)圖（單張）。透射光檢測器（TLD）成像，通過488納米、561納米和660納米的激發(fā)波長創(chuàng)建 RGB 疊加圖像。
488nm、561nm和638nm波長的激發(fā)，生成RGB疊加圖。
底部：與上述相同視場的TauContrast圖像，最大投影展示。

以 "光速 "探索

用LIGHTNING對細(xì)胞內(nèi)成分進(jìn)行成像。