超高效液相色譜質(zhì)譜UPLC-q-tof-MS使用步驟詳細介紹
瀏覽次數(shù):737 發(fā)布日期:2024-9-13
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一、開機
1.打開電腦,輸入用戶名:waters密碼: administrator 進入電腦系統(tǒng)桌面;
2.打開液相各個模塊的電源(沒有順序);
3.打開氮氣發(fā)生器的電源(或液氮瓶的開關(guān)),確證壓力指示在100 psi或0.7 MPa;打開氬氣減壓閥確證壓力指示在7 psi或0.05 MPa(如果是HDMS, 還需要打開氦氣減壓閥確證壓力指示在7 psi);
4.打開質(zhì)譜電源開關(guān)(在質(zhì)譜背面板右側(cè)位置有四個黑色的可以上下搬動的開關(guān),按照從下向上的順序依次將這四個開關(guān)搬到向上的位置,質(zhì)譜 電源就打開了);
5.等待5分鐘(或是進入桌面的hyperterminal文件夾,雙擊其中的的hypertrm 圖標(biāo),在name處輸入epc并點擊OK,接著在彈出的窗口中在Connect using 中選擇com1并點擊OK,在彈出的窗口中將Bits per second設(shè)為9600并點 擊OK,在彈出的窗口中直至出現(xiàn)Done executing startup script 'script.txt' 的信息,表明質(zhì)譜啟動完畢);
6.雙擊桌面上的Masslynx V4.1 圖標(biāo),打開Masslynx 軟件,等待在Masslynx 的主窗口狀態(tài)欄中部偏右的位置出現(xiàn)“Not Scanning”的信息;
7.打開MS Console窗口,左邊欄依次選中/Synapt G2 QTOF/Intellistart,在右 側(cè)窗口中點擊operate快捷圖標(biāo);
注意:在點擊operate 圖標(biāo)后應(yīng)該能聽到外置真空泵發(fā)出很大的噪音,隨后聲音逐漸變;
8.打開MS tune 窗口,單擊氬氣的控制開關(guān),使氬氣關(guān)閉。然后等待直至 右下角紅色的方塊變?yōu)榫G色,表明儀器可以工作了; 注意:通常這個過程需要7-8個小時,長時間不用則需要兩天左右。也可以從MS tune/view/vacuum中觀察真空度得變化,當(dāng)TOF位置的真空度小1.2×10-6時,右下角紅色方塊會變成綠色;
9.開機結(jié)束。
二、每天開始試驗流程
1.打開MS tune窗口,點擊右下角operate 圖標(biāo),右側(cè)方塊變綠色后儀器可以 使用;
2.在Inlet Method窗口中編輯液相方法并保存;
3.在Inlet Method窗口中,使用Start up System功能平衡液相系統(tǒng);
4.在MS tune窗口中設(shè)置質(zhì)譜的參數(shù),主要是MS tune/ESI 界面中各種電壓,氣體和溫度;
5.在MS Console\Synapt G2\Intellistart窗口中完成:Create calibration和Lockspray Setup兩項內(nèi)容,結(jié)果均應(yīng)為Pass;
注意:
(1)Create Calibration,溫度恒定的前提下一個星期做一次,若溫度波動 大,則測試樣品前做一次;
(2)Lock Spray Source Setup,2-3天校一次;
(3)Detector Setup第一年一個月做一次,2500-4000V,以保證靈敏度,若 3-4個月未做,儀器會自動提醒并強制進行Detector Setup;
(4)Detector Setup的Positive與Negative都是單獨做,不能同時做。
6.在MS method窗口中編輯質(zhì)譜方法,確保調(diào)用最新的Lockspray方法和 Enable MS event;
7.在Masslynx的主界面上編輯進樣序列,確保Sample name,MS method,Inlet method,Bottle position and Injection volume 都選擇相應(yīng)的參數(shù);
8.點擊進樣按鈕開始進樣。
三、重啟儀器過程
1.關(guān)閉所有的軟件,并重啟電腦,直至顯示windows桌面;
2.在質(zhì)譜背面板右側(cè)位置有一個銀色的可以上下搬動的按鈕,將其搬至向 下的位置(向上的位置為Auto,向下的位置為Pump Override,在搬動過 程中,需要將按鈕向外稍微用力才可以上下搬動);
3.從上向下依次關(guān)閉質(zhì)譜背面板右側(cè)除了Vacuum位置的其它三個黑色的 開關(guān);
4.等待15分鐘;
5.從下向上依次將質(zhì)譜背面板右側(cè)除了Vacuum 位置的其它三個黑色的開 關(guān)搬到向上的位置;
6.等待5分鐘(或是進入桌面的hyperterminal 文件夾,雙擊其中的的hypertrm 圖標(biāo),在name處輸入epc并點擊OK,接著在彈出的窗口中在Connect using 中選擇com1并點擊OK,在彈出的窗口中將Bits per second設(shè)為9600并點 擊OK,在彈出的窗口中直至出現(xiàn)Done executing startup script 'script.txt' 的信息,表明質(zhì)譜啟動完畢);
7.雙擊桌面上的Masslynx V4.1 圖標(biāo),打開Masslynx 軟件,等待在Masslynx 的主窗口狀態(tài)欄中部偏右的位置出現(xiàn)“Not Scanning”的信息;
8.打開MS tune 窗口,單擊氬氣的控制開關(guān),使氬氣關(guān)閉?吹組S tune左 下角出現(xiàn)“Pump Override Activated”信息后,找到質(zhì)譜背面板右側(cè)位置 的一個銀色的可以上下搬動的按鈕,將其搬至向上的位置。這時“Pump Override Activated”信息將會消失;
9.點擊MS tune窗口右下角的operate按鈕,看到右下角紅色方塊變成綠色后 完成;
10. 重啟完畢。
四、關(guān)機過程
1.打開MS tune窗口,點擊Vacuum/Vent,在彈出的對話框中選擇Yes;
2.等待約5 分鐘(在這個過程中應(yīng)該能聽到分子泵降速的聲音,也可以觀察MStune\View\Vacuum, 六個Turbo speed 會逐漸下降,直至六個分子泵 的轉(zhuǎn)速均降至5以下,表明真空已經(jīng)關(guān)閉);
3.關(guān)閉所有軟件和電腦;注意關(guān)閉軟件順序:先關(guān)閉子程序,最后關(guān)主軟件程序;
4.關(guān)閉液相所有模塊的電源;
5.關(guān)閉質(zhì)譜的電源(在質(zhì)譜背面板右側(cè)位置有四個黑色的可以上下搬動的 開關(guān),按照從上向下的順序依次將這四個開關(guān)搬到向下的位置);
6.關(guān)閉氮氣發(fā)生器的電源或是液氮罐的開關(guān);
7.關(guān)閉氬氣減壓閥(如果是HDMS 還需要關(guān)閉氦氣減壓閥);
8.關(guān)機結(jié)束。
五、日常維護及注意事項
1.流動相流動相:
(1)水相:2-3天換一次;
(2)有機相:一般不用換;
2.更換緩沖液后,需要重新校準(zhǔn)體積;
3.更換進樣針后,需要重新校準(zhǔn)針體積、針坐標(biāo)并清洗泵頭;
4.樣品盤更換:更換后一定要用軟件設(shè)定好并傳送至儀器硬件,以免進樣出錯:48孔2mL盤,藍色;96孔2mL盤,白色;
5.液相方法相關(guān)快捷鍵:方法編輯完畢并保存后,需要點擊快捷欄最后一個“Load”,將方法的初始條件傳送至液相,以便后續(xù)運行進樣程序;
6.注意監(jiān)察使用不同流動相(有機相及是否加緩沖液等)柱壓的正常范圍,以 便今后判斷問題之所在;
7.更換新柱子:斷開所有(任何檢測器);用純甲醇或純乙腈沖柱子1小時以上(試劑流向Waste);
8.編輯液相方法:未知樣品可以先跑一個大梯度:90%水至100%乙腈,然后再調(diào)整;
9. Standby:
(1)3-4天不用:Source Standby;
(2)一星期不用:Instrument Standby;
10.MS Tune在3-4天不用或一星期不用時,將Source溫度降至60℃或80℃;
11.清洗離子源:
(1)先降溫,再清洗;
(2)若不是很臟,則50%甲醇+50%水清洗;
(3)若很臟,清洗試劑依次為:
45%甲醇+45%水+10%甲酸;100%水;100%甲醇;d. N2吹干;
12.樣品制備:
(1)用流動相溶樣;
(2)用0.22μm樣品過濾膜過濾;
(3)放入Waters UPLC適用的樣品瓶;
13.色譜柱保存:
(1)在室溫條件下,如果超過四天不使用反相ACQUITY UPLC色譜柱 及ACQUITY UPLC BEH Amide色譜柱,請將柱子保存在100%乙腈 中;
(2)對于高溫條件下的應(yīng)用,在工作結(jié)束后即快速將色譜柱保存在100%乙腈 中以延長色譜柱的使用壽命;
(3)不要將色譜柱保存在緩沖鹽流動相條件下;
(4)如果流動相中含有緩沖鹽,先用10倍柱體積的液相色譜級水(大比例)沖洗色譜柱,之后用100%乙腈替換保存。如果沒有進行這一中間步驟直接換成100%乙 腈將會導(dǎo)致緩沖鹽析出;
14.在使用時應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按要求操作,注意保養(yǎng)維護,每次使用、維護完畢后,應(yīng) 當(dāng)詳細填寫使用記錄。