1 目的
本SOP規(guī)定了安捷倫1200型液相色譜儀的操作、維護(hù)清潔及注意事項(xiàng)，以達(dá)到操作者正確操作及維護(hù)的目的。

2 范圍
本SOP適用安捷倫1200型液相色譜儀的操作、維護(hù)清潔及注意事項(xiàng)。

3 職責(zé)
儀器操作人員執(zhí)行本SOP。

4 內(nèi)容
4.1 儀器描述
安捷倫1200型液相色譜儀由安捷倫科技有限公司生產(chǎn)，主要由工作站、高效液相色譜儀單元泵（G1310A）、手動(dòng)進(jìn)樣器（7725i）、可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器（G1314B）等部件組成。

4.2 操作方法
4.2.1 開機(jī)準(zhǔn)備：
①啟動(dòng)計(jì)算機(jī)：打開計(jì)算機(jī)電源，登陸windows操作系統(tǒng)。
②啟動(dòng)液相：打開Agilent 1200各模塊電源。待Agilent 1200各模塊自檢完成后(各模塊右上角指示燈為黃色或者無色)，雙擊“儀器1聯(lián)機(jī)”圖標(biāo)，或者“開始->所有程序->Agilent Chemstation->儀器1聯(lián)機(jī)”。
③開啟工作站：工作站打開，點(diǎn)擊“方法和運(yùn)行控制”或者在“視圖”中選擇“方法和運(yùn)行控制”。打開儀器控制視圖：選擇“視圖->系統(tǒng)視圖”，即可顯示儀器控制視圖，選擇“視圖->樣品視圖”，即可顯示樣品信息視圖。
 

④配置流動(dòng)相：將流動(dòng)相裝入溶劑瓶中。設(shè)置溶劑瓶參數(shù)，在溶劑瓶圖形上單擊鼠標(biāo)左鍵，點(diǎn)擊“溶劑瓶填充量”設(shè)置溶劑瓶中流動(dòng)相實(shí)際體積。
⑤沖洗流動(dòng)相管路：旋開溶液排空閥，左鍵單擊泵圖標(biāo)，點(diǎn)擊“設(shè)置泵”，設(shè)置“流速”為5ml/min，沖洗通道即可。
⑥開啟模塊：?jiǎn)螕裘總�(gè)模塊右下角的按鈕，可以單獨(dú)啟動(dòng)模塊、或者單擊檢測(cè)器按鈕燈未點(diǎn)亮，檢測(cè)器圖形為黃色或者單擊“啟動(dòng)”按鈕，啟動(dòng)全部模塊，檢測(cè)器燈也將點(diǎn)亮。
⑦監(jiān)視基線：點(diǎn)擊按鈕或者“視圖->在線信號(hào)”打開“在線圖譜”。點(diǎn)擊“改變”按鈕，選擇“可選信號(hào)”中需要監(jiān)視的信號(hào)，“添加”到“選定信號(hào)中”。調(diào)整“窗口”中“X周范圍”，如需要畫“0”點(diǎn)基線，請(qǐng)選擇“畫零線”。調(diào)整Y軸“Y軸范圍”與“偏移量”或者選擇“Y軸自動(dòng)調(diào)整”來選擇合適的監(jiān)視圖形。
⑧平衡色譜柱、進(jìn)樣分析：關(guān)閉溶液排空閥（確認(rèn)泵流量為1ml/min），監(jiān)視壓力基線等待平穩(wěn)后，可以進(jìn)樣采集分析。

4.2.2數(shù)據(jù)采集方法編輯：
①設(shè)置泵：左鍵單擊泵圖標(biāo)，點(diǎn)擊“設(shè)置泵”或者點(diǎn)擊“儀器”的下拉菜單中選取“設(shè)置泵”后進(jìn)入泵的參數(shù)設(shè)置菜單。
a.流速---設(shè)置泵的流速，在“壓力限-上限”>200時(shí)，流速設(shè)置范圍為：0-5.00ml/min；在“壓力限-上限”<=200時(shí)，流速設(shè)置范圍為：0-10.00ml/min。
b.停止時(shí)間---設(shè)置泵停止分析的時(shí)間，時(shí)間范圍為：0.0-99999.00min或“無限制”。
c.后運(yùn)行時(shí)間---泵在后運(yùn)行時(shí)間保持后運(yùn)行狀態(tài)，從而延遲下一個(gè)分析的開始。在溶劑成分改變后（例如：在梯度洗脫后），可以使用“后運(yùn)行時(shí)間”使色譜柱達(dá)到平衡，時(shí)間范圍為：0.0-99999.00min或“無限制”。
d.壓力限---“上/下限”是最大/小壓力限制，達(dá)到“上限”或者“下限”值時(shí)，泵將自動(dòng)關(guān)閉，從而防止分析系統(tǒng)壓力超限。
e.時(shí)間表---通過在“時(shí)間”字段中輸入時(shí)間并在時(shí)間表的以下字段中輸入適當(dāng)?shù)闹�，可以使用時(shí)間表對(duì)分析過程中參數(shù)進(jìn)行設(shè)置。泵時(shí)間表中的值隨時(shí)間從初始值到時(shí)間表中定義的時(shí)間所對(duì)應(yīng)的值發(fā)生線性變化（例如，溶劑梯度）。

②控制：左鍵單擊泵圖標(biāo)，點(diǎn)擊“控制”或者點(diǎn)擊“儀器”的下拉菜單“更多泵”中選取“控制”后進(jìn)入泵的控制菜單，控制泵的“啟動(dòng)”，“關(guān)閉”或者“待機(jī)”狀態(tài)。

③手動(dòng)進(jìn)樣器：在設(shè)置“運(yùn)行控制->樣品信息”后，將手動(dòng)進(jìn)樣閥扳至“load”狀態(tài)進(jìn)樣（將樣品裝入到定量環(huán)內(nèi)）。對(duì)于7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥，樣品進(jìn)樣量為定量環(huán)體積的50%以下或者滿定量環(huán)進(jìn)樣，否則進(jìn)樣量不準(zhǔn)確。進(jìn)樣后，將手動(dòng)進(jìn)樣器扳至“inject”狀態(tài)，工作站自動(dòng)開始記錄采集數(shù)據(jù)。

分析完成后，將手動(dòng)進(jìn)樣閥扳至“load”狀態(tài)，用定量環(huán)的5倍體積左右的甲醇清洗定量環(huán)，再在“inject”狀態(tài)下清洗排空管路。清洗進(jìn)樣口，防止殘留樣品污染下次進(jìn)樣。

④設(shè)置可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器：左鍵單擊可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器圖標(biāo)，點(diǎn)擊“設(shè)置VWD信號(hào)”或者點(diǎn)擊“儀器”的下拉菜單“設(shè)置 VWD 設(shè)置信號(hào)”后進(jìn)入可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器的參數(shù)設(shè)置菜單：

a.波長(zhǎng)---設(shè)置VWD檢測(cè)波長(zhǎng)。
b.峰寬---設(shè)置為色譜圖中的預(yù)期的最窄峰。峰檢測(cè)器將忽略比峰寬設(shè)置窄很多或者寬很多的所有峰。
c.停止時(shí)間---設(shè)置VWD停止分析時(shí)間。一般設(shè)置為“與泵一致”即可。

當(dāng)VWD與其他檢測(cè)器一起工作時(shí)，關(guān)閉檢測(cè)器的燈，分析將停止。如果希望關(guān)閉檢測(cè)器的燈時(shí)也能進(jìn)行分析，請(qǐng)?jiān)?ldquo;設(shè)置 VWD 信號(hào)->更多信息->特殊設(shè)置值（設(shè)置）”中選擇“當(dāng)燈關(guān)閉時(shí)也進(jìn)行分析”。

⑤控制：左鍵單擊可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器圖標(biāo)，點(diǎn)擊“控制”或者點(diǎn)擊“儀器”的下拉菜單“更多 VWD”中選取“控制”后進(jìn)入可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器的控制菜單：

a.燈---控制檢測(cè)器燈的開關(guān)。
b.開燈---選擇，則在打開電源的同時(shí)也點(diǎn)燈。為了延長(zhǎng)燈的壽命，建議不選此項(xiàng)，以便在沖洗系統(tǒng)或者其他不需要檢測(cè)器工作的情況下節(jié)省燈的消耗。

4.2.3數(shù)據(jù)分析方法編輯：從“視圖”菜單中，點(diǎn)擊“數(shù)據(jù)分析”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面從“文件”菜單中選擇“調(diào)用信號(hào)”選項(xiàng)，選中您的數(shù)據(jù)文件名，點(diǎn)擊確定，數(shù)據(jù)被調(diào)出。
①譜圖優(yōu)化：
a.從“圖形”菜單中選擇“信號(hào)選項(xiàng)”；
b.從“范圍”中選擇“全量程”或“自動(dòng)量程”及合適的顯示時(shí)間或選擇“自定義量程”手動(dòng)輸入X、Y坐標(biāo)范圍進(jìn)行調(diào)整，點(diǎn)擊“確定”。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的顯示比例合適為止。選中化合物的名稱前的空白框
c.選擇“圖形->新建標(biāo)注”，在工作站窗口右邊打開圖形編輯菜單，可以在色圖譜中任意位置添加文字、圖形等內(nèi)容；
d.選擇“圖形->信號(hào)選項(xiàng)”中選擇“化合物名稱”即可將命名的化合物名稱添加到當(dāng)前的色譜圖中。

②積分參數(shù)優(yōu)化：
a.自動(dòng)積分方法：從“積分”菜單中選擇“積分事件”選項(xiàng)，選擇合適的“斜率靈敏度”，“峰寬”，“最小峰面積”，“最小峰高”。從“積分”菜單中選擇“積分”選項(xiàng)，則數(shù)據(jù)被積分。如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。

4.2.4建立全新完整方法向?qū)В?/span>
①新建完整方法：選擇“方法->新建方法”后，點(diǎn)擊“方法->編輯完整方法”編輯新方法。
選擇“方法信息”、“儀器/采集”、“數(shù)據(jù)分析”,“數(shù)據(jù)分析”也可以在“數(shù)據(jù)采集后”后再加入方法中。

寫入方法注釋，而后按照數(shù)據(jù)采集方法編輯與數(shù)據(jù)分析方法編輯中所述內(nèi)容，根據(jù)具體的儀器配置完成下面步驟的設(shè)置。
a.設(shè)置泵參數(shù)。
b.設(shè)置自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)。
c.設(shè)置檢測(cè)器參數(shù)。
d.信號(hào)細(xì)節(jié)可以留空不選。
e.設(shè)置積分方法。
f.設(shè)置報(bào)告方法

②保存方法：選擇“方法->保存方法/方法另存為”。
③保存即時(shí)改變的方法：通過在線改變數(shù)據(jù)采集或者在線/離線改變數(shù)據(jù)分析參數(shù)而變更方法，可以通過選擇“方法->保存方法/方法另存為”或者保存新的參數(shù)到現(xiàn)在的方法中或另存為新方法。
④調(diào)用方法：通過選擇“方法->調(diào)用方法”或調(diào)用已有的方法。方法一經(jīng)調(diào)用便立即生效。

4.2.4進(jìn)樣：選擇“運(yùn)行控制->樣品信息”。查看單針，點(diǎn)擊
a.路徑---選擇數(shù)據(jù)文件存儲(chǔ)路徑。
b.選擇手動(dòng)或者前綴/計(jì)數(shù)器---命名數(shù)據(jù)文件名。
c.樣品位置---設(shè)置樣品位置，直接填寫數(shù)字即可，不需要寫“樣品瓶”。
d.運(yùn)行方法---保存樣品信息并運(yùn)行方法。
e.確定---保存樣品信息，后“運(yùn)行控制->運(yùn)行方法”。

4.2.5 關(guān)機(jī)
①關(guān)閉檢測(cè)器的燈：G1314B（可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器），關(guān)閉檢測(cè)器的燈后沖洗系統(tǒng)，可以延長(zhǎng)檢測(cè)器燈的壽命。
②沖洗系統(tǒng)：

a.沒有鹽緩沖溶液的流動(dòng)相：（反相系統(tǒng)）用85%~90%有機(jī)相+15%~10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱或者適宜的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱；
b.有鹽緩沖溶液的流動(dòng)相，（反相系統(tǒng)）用85%~90%水相+15%~10%有機(jī)相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱（反相系統(tǒng)），除去反相色譜柱與系統(tǒng)中的鹽溶液。然后用85%~90%有機(jī)相+15%~10%水相沖洗系統(tǒng)和反相色譜柱。

③封存色譜柱：（反相系統(tǒng)）用90%~95%有機(jī)相+10%~5%水相封存反相色譜柱，兩端封死。（如長(zhǎng)時(shí)間存放可將柱子完全侵泡有機(jī)相內(nèi)，以防用純有機(jī)相封存反相色譜柱，如果長(zhǎng)期保存有機(jī)相會(huì)揮發(fā)）。
④關(guān)閉電腦：將泵流速逐步降至0ml/min，單擊“關(guān)閉”按鈕關(guān)閉所有模塊，退出化學(xué)工作站，關(guān)閉電腦。
⑤關(guān)閉模塊：關(guān)閉所有模塊電源開關(guān)。

4.3常見問題解決方法
4.3.1 工作站無法聯(lián)機(jī)：確認(rèn)打開Agilent 1200所有模塊電源：
①查看Agilent 1200網(wǎng)卡地址，如果使用bootp程序，請(qǐng)查看儀器配置中IP設(shè)置，如果未使用bootp程序，通常儀器默認(rèn)地址為：192.168.254.11。
②查看電腦網(wǎng)卡地址，“開始->控制面板->網(wǎng)絡(luò)連接”，雙擊“本地連接”，單擊“屬性”，雙擊“Internet協(xié)議（TCP/IP）”，選擇“使用下面得IP地址”，填入“地址”：192.168.254.10，“子網(wǎng)掩碼”：255.255.255.0。如使用bootp程序，請(qǐng)將IP地址與Agilent 1200的IP地址前9個(gè)數(shù)字設(shè)為一樣，后一位設(shè)為1~254之間，但不與Agilent 1200網(wǎng)卡地址相重復(fù)即可。
③配置工作站，打開配置編輯器“配置->儀器”，選擇“Modular LC System”或者“Modular 3D LC System”，選擇“1100/1200 ACCESS->添加”，在“通過IP地址識(shí)別”輸入192.168.254.11或者bootp中配置的地址，保存，退出。

4.3.2 菜單顯示不完全：選擇“視圖->全部菜單”。
4.3.3 如何調(diào)整峰純度報(bào)告樣式：選擇“光譜->光譜選項(xiàng)”，打開“光譜選項(xiàng)”菜單，選擇“純度->高級(jí)”，在“純度計(jì)算”里面根據(jù)需要選擇“類似曲線顯示為”：Ln（相似性和閾值）；相似性/閾值；純度比率，將顯示不同的純度報(bào)告樣式。

4.3.4 如何將“峰純度”和“庫檢索”結(jié)果自動(dòng)生成報(bào)告：選擇“視圖->報(bào)告版面設(shè)計(jì)”或者，進(jìn)入報(bào)告版面設(shè)計(jì)界面。

選擇“文件->打開模板”或者，打開“LIBRARY_CHS”模板，選擇“文件->添加到報(bào)告模式中”，輸入報(bào)告格式名稱后，將“庫檢索”和“峰純度”模板添加到“數(shù)據(jù)分析->報(bào)告->設(shè)定報(bào)告”中。選擇“報(bào)告->自動(dòng)檢索譜庫”，設(shè)定需要檢索的譜庫以及檢索參數(shù)以及峰純度閾值后“確定”保存退出。選擇需要的色譜數(shù)據(jù)，選擇報(bào)告類型為剛添加入“報(bào)告格式”中的名字，打印報(bào)告即可。

5 注意事項(xiàng)
5.1設(shè)備運(yùn)行時(shí)禁止拔插接頭。
5.2禁止用水對(duì)設(shè)備進(jìn)行噴淋清洗。

6 清潔與維護(hù)
清潔儀器，清理工作現(xiàn)場(chǎng)，拔掉電源。