背景介紹
糖基化失調(diào),包括N-糖鏈分支增加、O-糖鏈縮短和高度唾液酸化，是癌細(xì)胞的典型特征,創(chuàng)造了一個獨(dú)特的"糖密碼"。這種糖密碼可被糖結(jié)合蛋白(又稱lectin)識別和結(jié)合。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
該實(shí)驗(yàn)使用細(xì)胞原位分子互作技術(shù)(儀)SPRm200研究了兩種lectin - 小麥膠凝素(WGA)和接骨木糖(SNA) - 與胰腺癌細(xì)胞(BxPC3)表面糖苷的實(shí)時結(jié)合動力學(xué)。
 

圖 1 胰腺癌細(xì)胞表面糖基化異常和兩種不同凝集素的結(jié)合位點(diǎn)示意圖
 

圖 2 使用 SPRm 200 對 BxPC3 細(xì)胞進(jìn)行動力學(xué)相互作用分析：(A) 從響應(yīng)性 ROI 中提取的親和力等溫線圖，顯示 SNA 凝集素與 BxPC3 細(xì)胞上的聚糖結(jié)合，單一群體紅色標(biāo)記顯示。(B) SNA凝集素動力學(xué)參數(shù)直方圖統(tǒng)計(jì)與高斯分布擬合，以提取細(xì)胞群體平均值和 95% 置信區(qū)間。(C) 從響應(yīng)性 ROI 中提取的親和等溫線圖，顯示 WGA 凝集素與 BxPC3 細(xì)胞中的聚糖結(jié)合相互作用，兩個不同的群體以藍(lán)色和綠色標(biāo)記顯示。(D) WGA凝集素動力學(xué)參數(shù)直方圖統(tǒng)計(jì)與高斯分布擬合，以提取細(xì)胞群體平均值和 95% 置信區(qū)間。
 

表 1 凝集素與 BxPC3 胰腺細(xì)胞結(jié)合的總結(jié)

結(jié)果
SPRm200允許無標(biāo)記、實(shí)時檢測單個細(xì)胞上lectin-糖苷相互作用,提供了這些相互作用的細(xì)節(jié)和異質(zhì)性結(jié)合信息。數(shù)據(jù)顯示，與WGA結(jié)合到N-乙酰氨基葡萄糖和唾液酸殘基的更為異質(zhì)化的動力學(xué)相比，SNA與末端半乳糖連接的唾液酸有更高的結(jié)合親和力和選擇性。

SPRm200能夠生成親和力等溫線圖和動力學(xué)參數(shù)分布，揭示了復(fù)雜的多模式lectin-糖苷相互作用，這是傳統(tǒng)的終點(diǎn)法測量或親和力測量技術(shù)所無法觀察到的。

討論
了解這些lectin-糖苷詳細(xì)的相互作用機(jī)制，對于推進(jìn)我們對腫瘤細(xì)胞表面糖基化修飾的認(rèn)知及其在癌癥發(fā)生中的生物學(xué)作用，甚至為開發(fā)新的診斷和治療方法均能提供至關(guān)重要的信息。

SPRm 200 系列
基于細(xì)胞原位分子互作技術(shù)(儀)SPRm200集成了光學(xué)顯微鏡和SPR，是一種可用于細(xì)胞原位測量膜蛋白結(jié)合活性的強(qiáng)大技術(shù)。它允許通過明場測量樣品的表型變化，同時通過 SPR 測量結(jié)合強(qiáng)度和動力學(xué)。
 

關(guān)鍵特點(diǎn)

• 細(xì)菌或病毒代謝活性或納米粒子的結(jié)合活性，藥物遞送設(shè)計(jì)研究。
• SPR 光學(xué)顯微鏡，一臺儀器中集成明場成像和SPR檢測。
• 大視野，高分辨率光學(xué)元件，可觀察單個或多個細(xì)胞。
• 體外、無標(biāo)記結(jié)合活性映射，提供單個細(xì)胞原位的SPR傳感圖、結(jié)合活性圖以及結(jié)合動力學(xué)常數(shù) (ka、kd、KD)。

了解更多SPRm 200信息，可點(diǎn)擊鏈接觀看：

• 【SPRM細(xì)胞膜蛋白原位分子互作分析系統(tǒng)】 https://b23.tv/g2eoEMi
• 【BI webnair 】 https://b23.tv/aS00RX0