前言
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO）是治療性蛋白質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)的重要平臺(tái)，被廣泛應(yīng)用于重組抗體藥物的生產(chǎn)。在抗體工藝研發(fā)中，一次性生物反應(yīng)器（Single-use bioreactor，SUB）具有使用靈活、交叉污染風(fēng)險(xiǎn)低、清潔驗(yàn)證成本低、提升生產(chǎn)效率^[1]等優(yōu)點(diǎn)，受到研發(fā)和生產(chǎn)企業(yè)的青睞。

在之前的實(shí)驗(yàn)中，我們使用Endura SUB^® 3L一次性細(xì)胞罐(非浸入式DO電極）進(jìn)行抗體（CHO-K1）工藝可行性驗(yàn)證。本次實(shí)驗(yàn)在Endura SUB^® 15L 一次性細(xì)胞罐進(jìn)行抗體（CHO-K1）工藝可行性驗(yàn)證。培養(yǎng)過(guò)程中最高細(xì)胞密度達(dá)1.32×10⁷cells/mL，前期細(xì)胞活率維持在95%-100%之間，培養(yǎng)第14天檢測(cè)蛋白表達(dá)量為6.63g/L。結(jié)果表明Endura SUB^® 15L一次性生物反應(yīng)器能夠滿足抗體生產(chǎn)中細(xì)胞培養(yǎng)及蛋白表達(dá)工藝需求。

圖1 D2MS設(shè)備和數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)(左）+Opti-Cell mini生物反應(yīng)器控制器（中）+Endura SUB^® 15L一次性細(xì)胞罐（右）

材料和方法

控制器：迪必爾生物 Opti-Cell mini 生物反應(yīng)器

罐體：Endura SUB® 15L一次性細(xì)胞罐

本次實(shí)驗(yàn)以7.5×10⁵ cells/mL的細(xì)胞密度接種，pH、DO電極選擇浸入式�？諝庖�0.06 L/min（0.008 VVM）的通氣速率進(jìn)行恒通，DO由氧氣的通氣速率級(jí)聯(lián)控制，pH由二氧化碳（酸）通氣速率級(jí)聯(lián)控制。其他參數(shù)控制和補(bǔ)料控制見(jiàn)表1和表2。

表1 工藝控制參數(shù)設(shè)定

表 2 補(bǔ)料控制條件

結(jié)果和分析
本次實(shí)驗(yàn)細(xì)胞前期快速生長(zhǎng)，最高活細(xì)胞密度達(dá)1.32×10⁷ cells/mL，細(xì)胞活率維持在95%～100%之間，在第14天結(jié)束培養(yǎng)（圖2）。

葡萄糖（Glucose）濃度保持在2.49 g/L以上，保證糖的供給；并且此次培養(yǎng)的乳酸（Lactate）濃度在前期最高達(dá)1.35 g/L，第三天開(kāi)始下降，第七天至實(shí)驗(yàn)結(jié)束乳酸維持在0.04 g/L～0.08 g/L（圖3）。

此次培養(yǎng)過(guò)程二氧化碳分壓（pCO₂）在19.4 mmHg～35.9 mmHg之間波動(dòng)（圖4）。而pCO₂如果低于臨界值下限25 mmHg，對(duì)細(xì)胞以及抗體表達(dá)存在一定影響^[2]。

圖2 CHO-K1 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線及活率變化曲線

圖3 CHO-K1 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程葡萄糖消耗曲線和乳酸鹽代謝曲線

圖4 CHO-K1 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程 pCO₂及 pO₂變化曲線

圖5 CHO-K1 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程蛋白累積表達(dá)量

結(jié)論
在本次實(shí)驗(yàn)中，CHO-K1細(xì)胞進(jìn)行了長(zhǎng)達(dá)14天的培養(yǎng)，最終蛋白表達(dá)量為6.63g/L，與之前使用Endura SUB® 3L一次性細(xì)胞罐上進(jìn)行的CHO-K1細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致（第14天蛋白累計(jì)表達(dá)量達(dá)到6.859g/L）。結(jié)果表明，Endura SUB^® 15L一次性細(xì)胞罐可高效進(jìn)行基于CHO細(xì)胞的抗體工藝開(kāi)發(fā)，支持批次培養(yǎng)、補(bǔ)料分批（流加）培養(yǎng)和灌流培養(yǎng)等多種模式。

迪必爾生物一次性罐體擁有500mL-15L罐體規(guī)格、滿足150mL-10.5L工作體積的豐富產(chǎn)品線；傳統(tǒng)攪拌式罐體設(shè)計(jì)保證良好的放大性，滿足多種細(xì)胞培養(yǎng)和微生物發(fā)酵需求；可適配多種反應(yīng)器控制器；豐富的配件滿足各種功能需求，為當(dāng)前多變的生物工藝開(kāi)發(fā)提供可靠、高效的一站式解決方案。

[1] 王遠(yuǎn)山, 朱旭, 牛坤, 徐建妙. 一次性生物反應(yīng)器的研究進(jìn)展[J]. 發(fā)酵科技通訊, 2015, 44 (03): 56-64.
[2] Zhao Liang, Wang Chen, Wang Jiaqi, Fan Li, Chen Min, Ye Qian, Tan WenSong. Low CO₂ partial pressure steers CHO cells into a defective metabolic state.[J]. Biotechnology letters, 2023, 45(9) : 1103-1115.

應(yīng)用技術(shù)與工程研究中心（CARE） 汪興 供稿