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一、開(kāi)機(jī)前的準(zhǔn)備工作：
1．檢查設(shè)備電源、流路、信號(hào)連接是否完好；
2．流動(dòng)相：配制相應(yīng)的流動(dòng)相，經(jīng)0.22mm微孔濾膜抽真空過(guò)濾后，或檢查是否需要添加。適當(dāng)選擇濾膜，水系/有機(jī)系（反光面朝上）。
3．樣品溶液：按方法取樣或配制標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，0.22mm濾膜過(guò)濾。

二、開(kāi)機(jī)平衡系統(tǒng)：
1．開(kāi)機(jī)自檢：打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，儀器開(kāi)始自檢（4-5min），待屏幕上方出現(xiàn)“Idle”自檢完成。
2．脫氣：按面板右下方“Menu/Status”鍵進(jìn)入“Status”界面，移動(dòng)光標(biāo)至“Degasser Mode”，按Enter選擇“On”，打開(kāi)在線脫氣。一般默認(rèn)是開(kāi)的。
3．設(shè)定柱溫：在“Status”界面，光標(biāo)至“Col Htr Set”，輸入目標(biāo)溫按Enter。
4．清洗柱塞桿：按“Menu/Status”鍵回到“Menu”界面，按下排功能鍵“Diag”，然后再按下排功能鍵“Prime Seal Wsh”，“Start”，沖洗1~2min后，“HALT”，“CLOSE”。
5．Wet Prime：在“Status”界面中“Composition”下，選擇將用到的溶劑通道為“100%”，按液晶屏幕右下角“Direct Function”鍵，移動(dòng)光標(biāo)選擇“Wet Prime”，“OK”，流速及時(shí)間可使用默認(rèn)值，也可自行設(shè)定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。

將每一個(gè)會(huì)用到的溶劑通道按照上述操作一次。（也可各通道選25%v 5ml/min，3min）。

6．注射器排氣泡及清洗：進(jìn)入“Direct Function”界面后，選擇“Purge Injector”，“OK”，默認(rèn)數(shù)值為6，“OK”。
7．清洗注射針：進(jìn)入“Diagnostics”界面，按下排功能鍵之“Prime Ndl Wsh”，“Start”，默認(rèn)30秒鐘，“Close”，即可返回“Diagnostics”界面。

注：以上4-7為溶劑系統(tǒng)前處理過(guò)程，建議每天開(kāi)機(jī)后依次進(jìn)行。若發(fā)現(xiàn)注射器中有氣泡，則可重復(fù)6）直至排除。

8．平衡柱子：在“Status”界面上，按流動(dòng)相比例設(shè)定各通道溶劑比例后，再Wet Prime操作一次，然后設(shè)置流速，平衡色譜柱30-60min。

三、編輯儀器方法和方法組:
1．打開(kāi)電腦雙擊桌面上的Empower，輸入用戶名system、密碼manager選擇項(xiàng)目和系統(tǒng)。
2．新建方法與方法組

新建方法：?jiǎn)螕舯O(jiān)視區(qū)方法組編輯向?qū)?mdash;新建—2695的參數(shù)：?jiǎn)未屋斔腕w積（建議130）、針頭深度0、脫氣設(shè)置開(kāi)、泵模式（等度/梯度）、柱溫。2489配置：通用（燈開(kāi)啟、波長(zhǎng)）—文件—另存為（輸入方法名XX）-保存-退出。

新建方法組：選擇所需的方法名稱，點(diǎn)擊下一步—輸入方法組名（與方法名一致）。

四、進(jìn)樣：
1．待“監(jiān)視基線”穩(wěn)定后，點(diǎn)擊“中斷樣品組”開(kāi)關(guān)，進(jìn)入“進(jìn)樣”階段。
2．當(dāng)進(jìn)行單進(jìn)樣時(shí)，在“運(yùn)行樣品”的“單進(jìn)樣”界面中輸入“樣品名”“功能”“方法組”“進(jìn)樣體積”“運(yùn)行時(shí)間”等；“單進(jìn)樣”就是單次進(jìn)樣，完成分析后即停止檢測(cè)（流動(dòng)相正常走動(dòng)）；
3．當(dāng)多進(jìn)樣時(shí)，在“運(yùn)行樣品”的“樣品”界面點(diǎn)擊“樣品瓶”輸入所有樣品分別所在位置（輸入所在編號(hào)），“進(jìn)樣體積”、“進(jìn)樣數(shù)”、“功能”、“方法組”、“運(yùn)行時(shí)間”等。
4．開(kāi)啟綠色“運(yùn)行”－“運(yùn)行樣品”開(kāi)關(guān)。

五、關(guān)機(jī)：
1．清洗注射器、針、柱塞桿：方法同開(kāi)機(jī)平衡系統(tǒng)中的4-7。
如果流動(dòng)相中含有鹽類，則實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須用水清洗柱塞桿。

2．如果流動(dòng)相使用了鹽，注意不要讓有機(jī)溶劑直接和緩沖鹽接觸，中間要使用水過(guò)渡一下。先用水/甲醇（或乙腈）=95/5在1ml/min流速下清洗色譜柱和系統(tǒng)30分鐘，再用甲醇或乙腈清洗30分鐘；如果流動(dòng)相中沒(méi)有使用鹽，則用甲醇或乙腈清洗色譜柱和系統(tǒng)30分鐘。

3．降低流速至0，待系統(tǒng)壓力回零后，退出Empower軟件系統(tǒng)，關(guān)閉HPLC系統(tǒng)。最后，關(guān)閉計(jì)算機(jī)及顯示器電源。

六、儀器使用注意事項(xiàng):
1．水性流動(dòng)相使用不要超過(guò)二天，最好每天新鮮配制以免微生物的生長(zhǎng)。
2．樣品組方法里的“功能”一項(xiàng)，有“平衡”及“平衡色譜柱”兩個(gè)選項(xiàng)，其功能不同。若儀器方法選用梯度，用“平衡色譜柱”可以在進(jìn)樣前運(yùn)行梯度來(lái)平衡柱子；而如果選用“平衡”則只是按照初始梯度條件等度平衡柱子。（當(dāng)然，如果用等度的流動(dòng)相條件，則兩者沒(méi)有區(qū)別）。
3．清洗柱塞桿的溶劑可以用水，或5%-10%甲醇（抑菌）。
4．清洗針的溶劑可以根據(jù)樣品溶解性選擇，如甲醇，或異丙醇-水（1：1）。
5．“實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要注射器排氣泡及清洗（purge injector）”，1次即可，包括了“purge sample loop”。
6．在線脫氣機(jī)打開(kāi)后，開(kāi)始時(shí)運(yùn)行加速，壓力很快降到1.0psi以下，然后維持0.5psi左右。
7．懷疑管路堵塞可卸下單向閥和在線過(guò)濾器進(jìn)行清洗。單向閥安裝注意方向（箭頭朝上）。
8．注射器中的氣泡快速有效排除方法：可以小心的卸下注射器抽吸甲醇排除氣泡后，注射器中保留少量溶劑，做“purge injector”小心安裝上，再做幾次“purge injector”觀察沒(méi)有氣泡即可。其他方法，可以在“purge injector”開(kāi)始后、注射器桿向上時(shí)，擰掉下邊螺絲，上下抽推排除氣泡，但手動(dòng)排泡過(guò)程要在purge injector結(jié)束前完成。溶劑用甲醇較好,不用同時(shí)擰掉上方注射器。
9．當(dāng)有多個(gè)“儀器方法”和“方法組”存在時(shí)要注意選擇當(dāng)前需要使用的“儀器方法”和“方法組”；當(dāng)“儀器方法”改變時(shí)尤其是流動(dòng)相組成等發(fā)生變化時(shí)，必須對(duì)系統(tǒng)重建平衡，也就是在新的“儀器方法”流動(dòng)相條件下平衡系統(tǒng)30分鐘以上，使得基線重新穩(wěn)定。
10．長(zhǎng)期不使用HPLC，應(yīng)該將色譜柱從系統(tǒng)拆除，拆除前應(yīng)該充分平衡色譜柱，一般為用甲醇或乙腈沖洗色譜柱40分鐘以上。
11．若色譜柱長(zhǎng)期保存未使用，則剛裝入HPLC系統(tǒng)時(shí)應(yīng)以流量0.2mL/min平衡過(guò)夜（注意斷開(kāi)檢測(cè)器避免不必要的檢測(cè)器耗損），然后再以0.8mL/min流量平衡30分鐘以上。以低流量緩慢的提高流速直到獲得穩(wěn)定的基線，這樣可以保證色譜柱的使用壽命。當(dāng)然在分析結(jié)束時(shí)沖洗色譜柱及系統(tǒng)后停止流量時(shí)也應(yīng)該從高流量逐步過(guò)渡到低流量直到流量為0。
12．系統(tǒng)短期不使用，應(yīng)該在每次使用后沖洗系統(tǒng)30分鐘以上。