固相萃取 (SPE)、LC-MS、制藥、復(fù)合硅膠、C18、Microlute® CSi

簡(jiǎn)介： 

固相萃取 (SPE) 是色譜分析中樣品制備的黃金標(biāo)準(zhǔn)。其功能在于捕捉、凈化和濃縮樣品，同時(shí)去除干擾化合物，以獲得可靠且靈敏的色譜數(shù)據(jù)。

傳統(tǒng)的SPE產(chǎn)品采用松散填裝的形式，將活性樹(shù)脂置于多孔濾網(wǎng)之間。然而，這類產(chǎn)品存在通道、樹(shù)脂質(zhì)量不一致及空隙問(wèn)題，導(dǎo)致回收率降低和重現(xiàn)性差。

Microlute® CSi 產(chǎn)品采用一種新型復(fù)合技術(shù)，將多孔塑料和色譜SPE樹(shù)脂混合。這項(xiàng)技術(shù)設(shè)計(jì)旨在消除由傳統(tǒng)松散填裝SPE板的固有問(wèn)題和不一致填裝引起的問(wèn)題。

本應(yīng)用說(shuō)明中的數(shù)據(jù)對(duì)C18樹(shù)脂制作的10 mg松散填裝板和10 mg復(fù)合板（Microlute® CSi）的SPE結(jié)果進(jìn)行了比較，二者均使用同一批次的C18樹(shù)脂制成。

圖1：復(fù)合技術(shù)的示意圖 

材料與方法： 

選擇了一系列由酸性、堿性和中性分析物組成的化合物。每種化合物的選擇都基于其固有的物理和化學(xué)特性，如pKa和LogP。使用多種化合物可以更詳細(xì)地比較每種板格式。采用適當(dāng)?shù)腟PE方法對(duì)每種化合物類別共進(jìn)行了六次重復(fù)測(cè)試。

SPE方法遵循典型的10 mg反相方法：

*：調(diào)節(jié) pH 值以中和酸性和堿性化合物上的任何電荷

**：調(diào)節(jié) pH 值以給酸性和堿性化合物充電

洗脫的樣品經(jīng)干燥處理并重溶后，然后用連接到Agilent單四極桿MS/MSD的Agilent 1260 HPLC高效液相色譜儀進(jìn)行分析。

表1:測(cè)試中使用的分析物的屬性[1] 

結(jié)果與討論：

回收率 

數(shù)據(jù)表明，兩種板在所有11種化合物的分析物回收率方面均表現(xiàn)良好。使用復(fù)合板和松散填充板的平均回收率分別為91%和88%，這表明SPE技術(shù)在色譜樣品制備中的有效性和實(shí)用性。

圖2：每種分析物的百分回收率，采用六個(gè)重復(fù)試驗(yàn)的平均回收率計(jì)算得出

重現(xiàn)性 

兩種板的重現(xiàn)性差異顯著，使用復(fù)合板時(shí)重現(xiàn)性有顯著改善。通過(guò)計(jì)算測(cè)試化合物的平均百分比相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（% RSD），松散填充板的RSD約為6%，而復(fù)合板（Microlute® CSi）的RSD不到2%。

圖3：每種分析物使用六個(gè)重復(fù)樣本進(jìn)行回收的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差百分比。

圖4：傳統(tǒng)散裝產(chǎn)品的常見(jiàn)問(wèn)題

以上數(shù)據(jù)表明，復(fù)合硅膠板在所有測(cè)試的11種化合物中的表現(xiàn)出顯著更高的重現(xiàn)性。松散填充板的較低回收率和較差的重現(xiàn)性可歸因于此工藝中固有的色譜介質(zhì)填充不一致的問(wèn)題（詳見(jiàn)圖4）。Microlute® CSi采用的獨(dú)特固定技術(shù)，確保每個(gè)孔的床重一致，液體流動(dòng)最佳，板與板之間保持一致。這確保了溶液和分析物與活性色譜樹(shù)脂之間的的可預(yù)測(cè)相互作用。

結(jié)論： 

在本研究中，10 mg Microlute® CSi C18復(fù)合硅板用于SPE在所有測(cè)試化合物中均表現(xiàn)出卓越的重現(xiàn)性和回收率。復(fù)合技術(shù)的均勻性使活性介質(zhì)均勻分布并最大化結(jié)構(gòu)內(nèi)的相互作用，從而產(chǎn)生非常一致的數(shù)據(jù)。如本短期研究所示，新型復(fù)合格式增強(qiáng)了回收率，并且與傳統(tǒng)的松散填裝板格式相比，重現(xiàn)性可提高至3倍。

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