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細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的原理及選擇方法分享

瀏覽次數(shù):1289 發(fā)布日期:2024-6-5  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
一、前言
細(xì)胞計(jì)數(shù)是一種確定樣品中細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量或細(xì)胞密度的測(cè)量方法;并且是構(gòu)成穩(wěn)定細(xì)胞培養(yǎng)、精確細(xì)胞實(shí)驗(yàn)以及精準(zhǔn)定量的基礎(chǔ)。無(wú)論是為轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備細(xì)胞,還是為實(shí)驗(yàn)接種精確數(shù)量的細(xì)胞,細(xì)胞計(jì)數(shù)以及活力分析都是許多實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的基礎(chǔ)
當(dāng)我們?cè)谘芯考膊∵M(jìn)展以及藥物或調(diào)節(jié)劑如何影響我們的健康時(shí),細(xì)胞計(jì)數(shù)的一致性以及準(zhǔn)確性就顯得尤為重要。雖然許多小型實(shí)驗(yàn)室仍在使用手動(dòng)計(jì)數(shù)的方法,但一些大型實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)開始使用自動(dòng)化系統(tǒng),來(lái)實(shí)現(xiàn)無(wú)縫的質(zhì)量控制和細(xì)胞處理,同時(shí)保持對(duì)下游實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要的精確度。
本篇文章能夠?yàn)槟峁┯行У姆椒ê蛯I(yè)的視角,以及基于應(yīng)用的案例研究,幫助您選擇一種適合您實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。

二、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀原理
目前,細(xì)胞計(jì)數(shù)方法分為手動(dòng)計(jì)數(shù)和自動(dòng)計(jì)數(shù)兩種, 自動(dòng)計(jì)數(shù)的儀器多種多樣,大致分為三種方法。下文將對(duì)目前市面上不同的計(jì)數(shù)原理進(jìn)行概述,供大家詳細(xì)參考。

1. 手動(dòng)計(jì)數(shù)與自動(dòng)計(jì)數(shù)
(1)手動(dòng)計(jì)數(shù)
常用的手動(dòng)計(jì)數(shù)方法是使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),此方法起初是為分析血液樣本而開發(fā)的。一直以來(lái),細(xì)胞生物學(xué)家都使用它來(lái)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),血球計(jì)數(shù)板在載玻片上帶有計(jì)數(shù)室以及Neubauer計(jì)數(shù)網(wǎng)格,通過(guò)移液管將樣本加入計(jì)數(shù)室,然后在顯微鏡下直接觀察細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
這種方法的優(yōu)點(diǎn)是初始以及維護(hù)成本低,但主要缺點(diǎn)包括:
  • 在有限的樣本濃度下,細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的穩(wěn)定性較低
  • 技能要求高,容易出現(xiàn)計(jì)算錯(cuò)誤,用戶之間的差異以及體積誤差均會(huì)導(dǎo)致數(shù)據(jù)不精確
  • 費(fèi)時(shí)費(fèi)力
(2)自動(dòng)計(jì)數(shù)
自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的功能各不相同,但都基于三種主要技術(shù):
  • 庫(kù)爾特電阻抗法
  • 基于圖像的細(xì)胞測(cè)量法
  • 流式細(xì)胞術(shù)
 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀不僅適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞與原代細(xì)胞,也適用于酵母、藻類和原生動(dòng)物等尺寸較小的細(xì)胞。與手動(dòng)計(jì)數(shù)相比,自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的優(yōu)勢(shì)包括:
  • 使細(xì)胞計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化,提高計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性
  • 提升計(jì)數(shù)速度,從而提高統(tǒng)計(jì)精度與通量。例如,屢獲殊榮的EVE™ Plus細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能夠在1秒內(nèi)得到明場(chǎng)下的細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果。
自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀還有許多其他優(yōu)點(diǎn),如易于操作的界面:可以評(píng)估細(xì)胞形狀與測(cè)量細(xì)胞大小,來(lái)確認(rèn)細(xì)胞類型特征。

2. 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)方法
在本章節(jié)將會(huì)講述自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)的三種方法以及各自的優(yōu)缺點(diǎn)。

(1)電阻抗計(jì)數(shù)法
電阻抗是利用庫(kù)爾特原理對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。首先需要將細(xì)胞懸浮在弱電解質(zhì)溶液中,然后將該溶液通過(guò)直徑精確的小孔,通過(guò)施加小電壓,從而形成一個(gè)“感應(yīng)區(qū)”,當(dāng)每個(gè)細(xì)胞通過(guò)孔道時(shí),都會(huì)置換出與自身體積相等的電解質(zhì)溶液,這種置換將產(chǎn)生電壓脈沖,該電壓脈沖代表細(xì)胞數(shù)量,可對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測(cè);較大的細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生更大振幅的脈沖,因此脈沖高度與細(xì)胞大小成正比。所以樣品中細(xì)胞濃度是通過(guò)精確控制和測(cè)量通過(guò)孔的液體體積來(lái)確定的
與光學(xué)計(jì)數(shù)相比,庫(kù)爾特計(jì)數(shù)法不受細(xì)胞顏色或折射率的影響,能夠計(jì)數(shù)樣品中存在的所有顆粒。如Beckman Coulter的Multisizer 4e細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,能精確計(jì)數(shù)細(xì)胞的數(shù)量以及大小。電阻抗計(jì)數(shù)法的優(yōu)勢(shì)在于,與手工計(jì)數(shù)相比,該方法提升了計(jì)數(shù)的精確度與速度,但它不能進(jìn)行活細(xì)胞/死細(xì)胞的分析,無(wú)法得出細(xì)胞存活率,且不能精確計(jì)數(shù)成團(tuán)的細(xì)胞。

(2)基于圖像的細(xì)胞計(jì)數(shù)
細(xì)胞成像技術(shù)的進(jìn)步使得基于圖像的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀迅速發(fā)展。這些系統(tǒng)使用與手動(dòng)計(jì)數(shù)相同的原理,但通常操作更為簡(jiǎn)便,并可以提供細(xì)胞形狀和大小的信息。操作流程是將樣本加入一次性計(jì)數(shù)板的腔室,調(diào)整預(yù)設(shè)的參數(shù)并進(jìn)行計(jì)數(shù)。
細(xì)胞計(jì)數(shù)是通過(guò)無(wú)標(biāo)記分析、細(xì)胞染色或熒光測(cè)量實(shí)現(xiàn)的,光學(xué)模式有明場(chǎng)、單色熒光或雙色熒光。這些自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀可以測(cè)量各種細(xì)胞類型和細(xì)胞密度,并且通常具有一系列附加功能,包括參數(shù)設(shè)置、細(xì)胞閥門大小、自動(dòng)聚焦以及數(shù)據(jù)存儲(chǔ)和記錄。他們主要是對(duì)單視野進(jìn)行拍照計(jì)數(shù),但近期研發(fā)的自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀可以拍攝多張視野圖像進(jìn)行計(jì)數(shù),以提高細(xì)胞計(jì)數(shù)的精度。
基于圖像的細(xì)胞計(jì)數(shù)有眾多優(yōu)勢(shì)
  • 通量?jī)?yōu)勢(shì)
  • 易于操作的界面
  • 運(yùn)營(yíng)成本低
  • 大大減少計(jì)數(shù)錯(cuò)誤
  • 降低用戶之間的差異性
​​​​​​​但基于圖像的細(xì)胞計(jì)數(shù)卻難以計(jì)數(shù)低濃度的細(xì)胞。

(3)流式細(xì)胞術(shù)
雖然流式細(xì)胞術(shù)提供了對(duì)細(xì)胞特性的快速定量,但在細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)需要先確定細(xì)胞濃度,或者使用額外的計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)。因此,復(fù)雜性和高成本可能會(huì)對(duì)小型實(shí)驗(yàn)室造成障礙。
然而,該技術(shù)可以在異質(zhì)混合細(xì)胞群中有效地分選細(xì)胞,所以可以用于計(jì)數(shù)原代細(xì)胞。使用特定體積的已知濃度的熒光微珠,將其添加到一個(gè)特定的樣品體積來(lái)創(chuàng)建一個(gè)已知的比例,然后通過(guò)測(cè)量被記錄的熒光微珠的數(shù)量來(lái)?yè)Q算樣品的體積,從而得到細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量。

基于圖像的流式細(xì)胞術(shù),可以在一個(gè)系統(tǒng)中定義多個(gè)參數(shù),是一種非常強(qiáng)大的細(xì)胞表征和分析工具,但同時(shí)也代表著昂貴的費(fèi)用以及繁瑣且專業(yè)的操作,現(xiàn)今的實(shí)驗(yàn)室很少單純地將流式細(xì)胞術(shù)用于細(xì)胞計(jì)數(shù),往往會(huì)用流式去做定性或定量分析細(xì)胞功能與分選細(xì)胞。

三、計(jì)數(shù)儀評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
市面上的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀多種多樣,大家對(duì)各品牌的計(jì)數(shù)儀也褒貶不一,那么我們?cè)撊绾慰陀^地評(píng)價(jià)一款細(xì)胞計(jì)數(shù)儀呢?這就需要參考細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)。
儀器行業(yè)的發(fā)展推動(dòng)了各種細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的發(fā)展,并廣泛地應(yīng)用于總細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類細(xì)胞計(jì)數(shù)。在缺乏參考資料的情況下,測(cè)量方法的準(zhǔn)確性很難確定。同時(shí)生物制劑的復(fù)雜性(如細(xì)胞類型、來(lái)源、制備等)也使這一問(wèn)題更加突出。因此在沒(méi)有參照材料或參照方法的情況下,需要制定措施來(lái)保證細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)量過(guò)程中的質(zhì)量。
本文提供了一種通過(guò)稀釋系列實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)分析得出的一組質(zhì)量指標(biāo)來(lái)評(píng)估細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法。該方法適用于總細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞分類計(jì)數(shù)、直接細(xì)胞計(jì)數(shù)和間接細(xì)胞計(jì)數(shù),前提是測(cè)量過(guò)程符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)(例如,將細(xì)胞應(yīng)為懸浮狀態(tài)),且該方法主要適用于真核細(xì)胞。
在細(xì)胞計(jì)數(shù)中獲得高置信度意味著測(cè)量既準(zhǔn)確又精確。具體來(lái)說(shuō),通過(guò)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)分析,可以評(píng)估描述偏離比例和變異系數(shù)(CV)的質(zhì)量指標(biāo),以評(píng)估細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)量過(guò)程的質(zhì)量。質(zhì)量指標(biāo)評(píng)估細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)量過(guò)程的整體質(zhì)量,其中測(cè)量過(guò)程包括樣品制備和處理、數(shù)據(jù)采集以及數(shù)據(jù)處理/校正。
 
1. 樣品制備
  • 測(cè)試材料應(yīng)為懸浮細(xì)胞,且細(xì)胞應(yīng)為單細(xì)胞、細(xì)胞聚集體或細(xì)胞團(tuán)聚體。
  • 用于為細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)量過(guò)程生成代表性測(cè)試樣本的制備和處理程序應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化,以保持測(cè)試樣本的特性。
  • 樣品制備程序應(yīng)避免對(duì)細(xì)胞造成損傷,防止改變其計(jì)數(shù)能力,并避免引入/減少可干擾或人為改善細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)量過(guò)程的碎片。
2. 稀釋分?jǐn)?shù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
使用一個(gè)細(xì)胞懸液作為母液,在預(yù)期濃度范圍內(nèi)稀釋為不同濃度的可重復(fù)代表性測(cè)試樣本,如果濃度和組成完全相同,則可以使用額外的細(xì)胞原液。
注:該圖描述了從單一細(xì)胞懸液開始的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),其中通過(guò)獨(dú)立稀釋得到一組包含3個(gè)重復(fù)代表性樣本(n=3)的稀釋分?jǐn)?shù),對(duì)每個(gè)代表性樣本進(jìn)行三次重復(fù)計(jì)數(shù)。
i表示細(xì)胞原液不同稀釋分?jǐn)?shù)的數(shù)量(i=1,.....,i);dfi表示不同的稀釋分?jǐn)?shù),值在0至1之間;ni表示為目標(biāo)稀釋分?jǐn)?shù)的具有代表性的重復(fù)測(cè)試樣本數(shù);kij表示第i個(gè)稀釋分?jǐn)?shù)的第j樣本的重復(fù)測(cè)量次數(shù);Yijk表示來(lái)自細(xì)胞原液的第i個(gè)目標(biāo)稀釋分?jǐn)?shù)的第j個(gè)重復(fù)代表性樣本的第k個(gè)重復(fù)計(jì)數(shù)樣本的值。

統(tǒng)計(jì)方法:
在該細(xì)胞計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)中,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析過(guò)程如下圖:
由該圖可得需計(jì)算四項(xiàng)指標(biāo):

①細(xì)胞計(jì)數(shù)平均值(Ydfi
細(xì)胞計(jì)數(shù)平均值(Ydfi)表示目標(biāo)稀釋分?jǐn)?shù)df的一組測(cè)試樣本的細(xì)胞計(jì)數(shù)平均值。
其中Yij表示df的第j個(gè)代表性測(cè)試樣本的k個(gè)重復(fù)計(jì)數(shù)值的平均值,由以下公式得出:
②變異系數(shù)(CV)
變異系數(shù)(CV)是衡量各觀測(cè)值變異程度的統(tǒng)計(jì)量。樣本測(cè)量精度應(yīng)使用重復(fù)性測(cè)量值的變異系數(shù)(CV)進(jìn)行評(píng)估,用百分比(%CV)表示。CV值越小,表示數(shù)據(jù)越穩(wěn)定,變異程度越小,反之則表示數(shù)據(jù)不穩(wěn)定,變異程度較大。CVij表示具有目標(biāo)稀釋分?jǐn)?shù)df的代表性測(cè)試樣品j的重復(fù)性觀測(cè)數(shù)值的變異系數(shù)。
%CVdfi表示具有目標(biāo)稀釋分?jǐn)?shù)df的一組n個(gè)代表性測(cè)試樣品的變異系數(shù)平均百分比。
③決定系數(shù)(R2)
決定系數(shù)R2是在數(shù)據(jù)分析和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)領(lǐng)域廣泛使用的指標(biāo),用于描述模型與一組觀測(cè)值的擬合程度。
其中,Y......是一組 n 個(gè)具有代表性的獨(dú)立測(cè)試樣本 j 的 Yij 的平均值;一組目標(biāo)稀釋分?jǐn)?shù) (DF) 的重復(fù)代表性測(cè)試樣本的 Yij 的平均值由公式給出:
④比例指數(shù)(PI)
用戶應(yīng)根據(jù)平滑殘差計(jì)算比例指數(shù)(PI)。
用戶應(yīng)根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)測(cè)量的預(yù)期用途選擇PI的計(jì)算方法。

3. 結(jié)果報(bào)告

細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)以細(xì)胞濃度表示,單位為細(xì)胞/ml,報(bào)告應(yīng)包含以下質(zhì)量指標(biāo):

四、NanoEnTek細(xì)胞計(jì)數(shù)儀
目前,市面上有各種各樣的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,因?yàn)榛趫D像的細(xì)胞計(jì)數(shù)原理與手動(dòng)計(jì)數(shù)原理相同,所以大部分成像儀均是利用成像對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。目前被廣泛應(yīng)用的計(jì)數(shù)儀品牌如下表所示:

NanoEnTek 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀系列曾在Select Science網(wǎng)站上獲得世界質(zhì)量認(rèn)證銀獎(jiǎng),該系列產(chǎn)品收獲了7200 多條評(píng)論和 4.8 分的星級(jí)評(píng)價(jià)(滿分5分);并且一次性血細(xì)胞計(jì)數(shù)板系列也獲得了質(zhì)量認(rèn)證白金獎(jiǎng)?wù)隆?/span>

蘇州奎克泰生物為韓國(guó)NanoEnTek中國(guó)區(qū)總授權(quán)?颂┥飸{借極佳的生命科學(xué)設(shè)備產(chǎn)品和優(yōu)質(zhì)的服務(wù),斬獲“2024年度創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)室設(shè)備提供商”獎(jiǎng),充分體現(xiàn)了我司的生命科學(xué)(細(xì)胞)設(shè)備類產(chǎn)品質(zhì)量、技術(shù)服務(wù)和行業(yè)影響力等多方面的實(shí)力獲得了肯定。
我司代理的計(jì)數(shù)儀系列中,EVE™細(xì)胞計(jì)數(shù)儀簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確,能對(duì)成團(tuán)細(xì)胞精準(zhǔn)計(jì)數(shù)、計(jì)算細(xì)胞活率,選擇細(xì)胞大小范圍;EVE™ Plus最快1秒出結(jié)果;EVE™ HT / HT FL高通量計(jì)數(shù)儀3min內(nèi)可一次性計(jì)48 個(gè)樣本。ADAM™ CellT是一款cGMP生產(chǎn)環(huán)境下可用的自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)儀及ADAMII™ LS是一款基于熒光強(qiáng)度的桌面圖像型流式細(xì)胞分析儀,能夠提供多功能實(shí)驗(yàn)和高準(zhǔn)確度結(jié)果(與流式細(xì)胞儀結(jié)果一致),穩(wěn)定性高。多款設(shè)備符合21 CFR Part 11要求,可在cGMP環(huán)境下使用,深受客戶贊譽(yù)。

 
并且,我司的計(jì)數(shù)儀系列在準(zhǔn)確度與精確度方面有著良好的優(yōu)勢(shì),相信會(huì)有一款細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能滿足您的需求。

1. EVE系列

EVE™自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀
準(zhǔn)確性:分別使用EVE與手工計(jì)數(shù)的方法對(duì)同一種細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)測(cè)試,結(jié)果證明EVE的計(jì)數(shù)結(jié)果與手工計(jì)數(shù)結(jié)果呈現(xiàn)高度相關(guān)性,且測(cè)量范圍優(yōu)于手工計(jì)數(shù)。

穩(wěn)定性:分別使用EVE、手工計(jì)數(shù)板、競(jìng)品對(duì)HepG2、MCF7、F9進(jìn)行計(jì)數(shù),每個(gè)樣本重復(fù)7次,結(jié)果證明EVE自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀與競(jìng)品相比,與手工計(jì)數(shù)結(jié)果更接近,且有更好的精確性。

EVE™ PLUS 超快速自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

準(zhǔn)確性:分別使用EVE PLUS與手工計(jì)數(shù)的方法對(duì)同一種細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)測(cè)試,結(jié)果證明EVE PLUS的計(jì)數(shù)結(jié)果與手工計(jì)數(shù)結(jié)果呈現(xiàn)高度相關(guān)性,且測(cè)量范圍優(yōu)于手工計(jì)數(shù)。

穩(wěn)定性:使用EVE Plus以及多臺(tái)儀器對(duì)多種細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),EVE Plus的計(jì)數(shù)結(jié)果與熒光計(jì)數(shù)儀的結(jié)果更接近,且穩(wěn)定性更好。

EVE™ HT高通量自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀
準(zhǔn)確性:與傳統(tǒng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀做對(duì)比,EVE HT在不同濃度和存活率下,計(jì)數(shù)結(jié)果與人工計(jì)數(shù)高度一致。

穩(wěn)定性:通過(guò)5臺(tái)EVE HT進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn),所得出的計(jì)數(shù)結(jié)果一致。

EVE™ HT FL高通量熒光自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀
準(zhǔn)確性:對(duì)于CHO細(xì)胞和PBMC,EVE™ HT FL測(cè)量的細(xì)胞總數(shù)與流式細(xì)胞儀所測(cè)結(jié)果高度相關(guān)。

穩(wěn)定性:通過(guò)5臺(tái)EVE™ HT FL儀器對(duì)三種細(xì)胞樣本(Jurkat、Hela、CHO)各測(cè)量16次,結(jié)果表明不同儀器之間測(cè)量結(jié)果高度一致。

2. ADAM系列

ADAM™ MC2&CellT超精確細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

準(zhǔn)確性:ADAM MC2測(cè)量的細(xì)胞總數(shù)與流式細(xì)胞儀所測(cè)結(jié)果高度相關(guān)。

穩(wěn)定性:使用ADAM MC2在低、中、高細(xì)胞濃度條件下計(jì)數(shù),不同細(xì)胞濃度下計(jì)數(shù)結(jié)果穩(wěn)定性高。

ADAM™ MC Plus & CellT Plus 超精確細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

準(zhǔn)確性:對(duì)不同濃度的PBMC細(xì)胞樣本進(jìn)行計(jì)數(shù)比較,通過(guò)與流式細(xì)胞儀以及手工計(jì)數(shù)結(jié)果比較,計(jì)數(shù)結(jié)果高度相關(guān)。

 
穩(wěn)定性:ADAM MC PLUS/CellT PLUS在低、中、高細(xì)胞濃度條件下計(jì)數(shù),不同細(xì)胞濃度下計(jì)數(shù)結(jié)果穩(wěn)定性高。

 
五、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀選擇方法
我們面對(duì)各種品牌,如何為自己的實(shí)驗(yàn)室選擇合適的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀呢?雖然一些自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(如流式細(xì)胞儀)的設(shè)備初始成本高,方案復(fù)雜,但是只要您的實(shí)驗(yàn)室選擇合適的自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀將為以后的實(shí)驗(yàn)帶來(lái)巨大的方便。在選擇儀器之前,我們需要確定影響計(jì)數(shù)方法選擇的重要因素:樣本類型。樣本類型決定了我們使用何種染色方法能更準(zhǔn)確地得到細(xì)胞的數(shù)量、細(xì)胞的存活率

1. 樣本類型
  • 實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞類型一般多為常規(guī)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞系,如腫瘤細(xì)胞系、哺乳動(dòng)物細(xì)胞系等,這些細(xì)胞的直徑通常在5-40μm。這類型的細(xì)胞計(jì)數(shù)往往簡(jiǎn)單易操作。
  • 從組織或血液中分離的原代細(xì)胞,如PBMC、脾細(xì)胞等,但由于細(xì)胞碎片頻繁存在、細(xì)胞隨時(shí)間降解以及消化細(xì)胞懸液中的細(xì)胞群異質(zhì)性,準(zhǔn)確測(cè)定細(xì)胞數(shù)是富有挑戰(zhàn)的。
  • 除細(xì)胞系與原代細(xì)胞外,也有一些別的樣本類型的計(jì)數(shù)需求,如酵母細(xì)胞、球藻細(xì)胞、芽孢桿菌等小粒徑樣本(1-10μm)
我們需要根據(jù)細(xì)胞類型選擇合適的自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀:
  • 針對(duì)于細(xì)胞系,我們可以選用基于臺(tái)盼藍(lán)的明場(chǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。臺(tái)盼藍(lán)染色是最常用且成熟的對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)且分析細(xì)胞活率的方法。TB是一種選擇性偶氮染料,無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞膜完整的活細(xì)胞,僅對(duì)死細(xì)胞進(jìn)行染色。
  • 針對(duì)于原代細(xì)胞、PBMC等,由于樣本的雜亂性,我們更推薦您選擇熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。使用熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能夠?qū)旌霞?xì)胞類型的復(fù)雜樣本進(jìn)行計(jì)數(shù),且計(jì)數(shù)結(jié)果相較于使用臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)原代細(xì)胞結(jié)果更加準(zhǔn)確。
  • 針對(duì)于特殊樣本的計(jì)數(shù)需求,我們需要關(guān)注儀器的計(jì)數(shù)直徑范圍,確保我們選擇的計(jì)數(shù)儀能覆蓋自己實(shí)驗(yàn)使用的樣本直徑。
  • 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀由于測(cè)量范圍的限制,所以也應(yīng)確保選擇的計(jì)數(shù)儀能覆蓋自己實(shí)驗(yàn)使用的細(xì)胞濃度范圍。

計(jì)數(shù)儀基本的要求是計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性以及計(jì)數(shù)速度,所以下文詳細(xì)列出了各個(gè)產(chǎn)品的特性,有助于您選擇合適的計(jì)數(shù)儀設(shè)備。

2. 計(jì)數(shù)儀準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性
選擇自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀代替手工計(jì)數(shù),計(jì)數(shù)儀結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性至關(guān)重要。
準(zhǔn)確性是計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)結(jié)果與真實(shí)值之間的差異,可以與手工計(jì)數(shù)結(jié)果對(duì)比,或者借助標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行驗(yàn)證計(jì)數(shù)儀準(zhǔn)確性。穩(wěn)定性是對(duì)同一樣本多次測(cè)量后的結(jié)果偏差在可允許范圍內(nèi),可用CV值(變異系數(shù))表示。一臺(tái)優(yōu)秀的計(jì)數(shù)儀,通常CV值<5%。

3. 檢測(cè)效率
當(dāng)選擇適合自己實(shí)驗(yàn)室的計(jì)數(shù)儀時(shí),除了考慮樣本、準(zhǔn)確性與穩(wěn)定性之外,檢測(cè)效率也是十分值得關(guān)注的一個(gè)因素。手動(dòng)計(jì)數(shù)的一個(gè)缺點(diǎn)是耗時(shí)耗力,那么自動(dòng)計(jì)數(shù)儀逐漸替代手動(dòng)計(jì)數(shù)的一大優(yōu)勢(shì)——省時(shí)省力,便是通過(guò)檢測(cè)效率來(lái)評(píng)估。一臺(tái)計(jì)數(shù)儀不僅要做到計(jì)數(shù)準(zhǔn)確與穩(wěn)定,快速也很重要。
檢測(cè)效率的評(píng)估主要通過(guò)單個(gè)樣本檢測(cè)時(shí)間與檢測(cè)通量評(píng)定。通常一個(gè)樣本,手動(dòng)計(jì)數(shù)的時(shí)間約為3-5min,計(jì)數(shù)儀在10s-2min時(shí)間不等,并且檢測(cè)時(shí)間也會(huì)受到聚焦方式的影響。一塊血球計(jì)數(shù)板有兩個(gè)計(jì)數(shù)槽,現(xiàn)在市面上的大多數(shù)自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀也采用的兩通道計(jì)數(shù)板;也有一些高通量的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,適用于當(dāng)一天需要檢測(cè)的樣本數(shù)量巨大時(shí)。
下表匯總了我司現(xiàn)有計(jì)數(shù)儀的檢測(cè)效率,您可以根據(jù)自己的需求進(jìn)行選擇。



4. 21 CFR Part 11
FDA 21 CFR Part 11 規(guī)定中,儀器設(shè)備的電子記錄被認(rèn)為具有與書面記錄和手寫簽名等同的效力,此法規(guī)確保了電子數(shù)據(jù)的有效性和可靠性。在生物制造行業(yè),質(zhì)量控制和數(shù)據(jù)管理功能可以提供一個(gè)方便的方法來(lái)跟蹤多個(gè)細(xì)胞批次和監(jiān)測(cè)不同的細(xì)胞操作安全。所以計(jì)數(shù)儀是否符合 21 CFR Part 11的規(guī)定也作為計(jì)數(shù)儀選擇的一個(gè)補(bǔ)充參考。

5. 其他因素
除以上所列條目外,還有一些因素也值得考慮,如是否需要外接電腦、性價(jià)比、服務(wù)等方面。
機(jī)型——我司自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀產(chǎn)品除高通量計(jì)數(shù)儀 HT與HT FL需要外接電腦外,其余設(shè)備均為一體機(jī),自帶觸控屏,無(wú)需配備電腦便可進(jìn)行計(jì)數(shù)操作,且設(shè)備體積較小,無(wú)需占據(jù)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部很大的空間,放置于桌面上便可通過(guò)觸控屏點(diǎn)擊操作,得到準(zhǔn)確的計(jì)數(shù)結(jié)果。
細(xì)胞閥門——許多自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀能夠根據(jù)細(xì)胞的大小、形狀、亮度等參數(shù)調(diào)節(jié),然后從計(jì)數(shù)范圍內(nèi)排除不需要的細(xì)胞。這一調(diào)節(jié)能夠?yàn)樘囟ǖ南掠螒?yīng)用選擇細(xì)胞,從計(jì)數(shù)中去除樣品碎片,以及在有多種細(xì)胞類型的樣品中識(shí)別單個(gè)細(xì)胞類型。為了便于使用,許多自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀還具有“配置文件存儲(chǔ)”功能,允許用戶保存已自定義好的參數(shù)閾值,以便下一次直接使用該參數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù),節(jié)省時(shí)間。
成團(tuán)細(xì)胞計(jì)數(shù)——雖然應(yīng)該采取一切措施來(lái)確保樣品準(zhǔn)備得當(dāng),但還是有細(xì)胞成團(tuán)/聚集的可能性,并且細(xì)胞成團(tuán)可能影響細(xì)胞的計(jì)數(shù)。自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀使用內(nèi)置的算法能提高對(duì)成團(tuán)細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。
性價(jià)比——儀器本身的價(jià)格會(huì)受到計(jì)數(shù)原理、計(jì)數(shù)通量、預(yù)設(shè)調(diào)整等配置的影響,熒光計(jì)數(shù)的價(jià)格高于明場(chǎng)計(jì)數(shù);計(jì)數(shù)通量越高那么價(jià)格也會(huì)越高;此外,還需考慮到耗材的成本以及后續(xù)儀器維護(hù)的成本,我司的計(jì)數(shù)儀耗材均使用一體壓成的工藝,更能保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性;使用流式以及庫(kù)爾特計(jì)數(shù)原理的計(jì)數(shù)儀都需進(jìn)行定期的維護(hù),因此儀器后續(xù)的維護(hù)費(fèi)用也是需要考慮的因素之一。
服務(wù)——服務(wù)包括售前售后、儀器試用、技術(shù)支持以及質(zhì)保期?颂┥飼(huì)為您持續(xù)提供高效專業(yè)的服務(wù)。
了解以上的內(nèi)容后,相信無(wú)論是需要原代細(xì)胞計(jì)數(shù)還是細(xì)胞系計(jì)數(shù)、明場(chǎng)還是熒光、常規(guī)通量還是高通量,我司具有極高性價(jià)比與專業(yè)服務(wù)保障的產(chǎn)品,會(huì)有一款能滿足您的需求。

來(lái)源:蘇州奎克泰生物技術(shù)有限公司
聯(lián)系電話:18551209891
E-mail:lipeipei9891@quictek.com

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