甲基丙烯酰化明膠（GelMA）由于具有生物兼容性好、可見光固化的特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞3D培養(yǎng)、組織工程、生物3D打印等研究領(lǐng)域。EFL團(tuán)隊(duì)研制的GelMA產(chǎn)品具有批次穩(wěn)定、服務(wù)專業(yè)等優(yōu)點(diǎn)，深受國內(nèi)外科研工作者的好評與認(rèn)可。為了幫助用戶更好的使用EFL-GM系列水凝膠產(chǎn)品，EFL團(tuán)隊(duì)現(xiàn)整理GelMA使用相關(guān)的高頻問題如下，可供參考。
  Q1：1g GelMA材料可以配多少溶液？

答：EFL推薦使用的工作液濃度范圍為5%-30%（w/v），1g可以配3.3-20mL工作溶液；用戶常用濃度范圍為5%-10%（w/v），1g可以配10-20mL工作溶液；附贈LAP送引發(fā)劑，無需再單獨(dú)購買。
 
Q2：GelMA的取代度有哪些型號？在GelMA表面接種細(xì)胞和把細(xì)胞混到GelMA里做三維培養(yǎng)，分別應(yīng)該選什么型號的GelMA？要是做3D打印，又應(yīng)該選什么型號呢？

答：
①EFL目前有氨基取代度為30%、60%和90%三種常用固定型號的GelMA，均有現(xiàn)貨。GM30、GM60和GM90均可應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)，同等條件下，取代度越高，固化后的水凝膠強(qiáng)度越強(qiáng)；每種細(xì)胞的最適取代度和最適強(qiáng)度均有所不同，建議您先用三個型號的水凝膠分別做一下預(yù)實(shí)驗(yàn)，篩選最適合的型號、濃度及固化條件。

②在所有型號GelMA的表面接種細(xì)胞效果都很好；對于細(xì)胞混GelMA里做三維培養(yǎng)的型號選擇上，EFL常用型號及使用參數(shù)推薦如下：5%GM30（w/v），EFL-LS-1601便攜式固化光源光照30-60s，5%GM60（w/v），EFL-LS-1601便攜式固化光源光照15-22s。

③GM30、GM60和GM90均可應(yīng)用于擠出式打印，均可復(fù)合其他材料一起做復(fù)合水凝膠擠出打印，可按需要打印的支架強(qiáng)度進(jìn)行取代度的選擇，如需載細(xì)胞擠出打印需同時考慮細(xì)胞生長情況進(jìn)行選擇。如做投影式光固化高精度打印，則優(yōu)選GM90，成形效果和載細(xì)胞性能均非常好。PS:用戶如有高強(qiáng)度、精加工雙光子打印成形、低溫敏性等額外的GelMA材料性能需求，可單獨(dú)咨詢EFL技術(shù)人員，提供更優(yōu)解決方案。
 
Q3：GelMA怎么保存？我放在-4℃冰箱里，發(fā)現(xiàn)溶液固化了，是不是變性了呀？

答： 干態(tài)套裝：室溫，3個月；4℃，12個月；-20℃，18個月。無菌溶液：4°C避光，7天；-20℃避光，6個月。低取代度的GelMA溶液建議現(xiàn)配現(xiàn)用，多次反復(fù)凍溶無法保證固化品質(zhì)。GelMA溶液具有溫敏性，低溫形成可逆的物理凝膠，室溫或冰箱冷藏避光保存時凝膠化屬于正�，F(xiàn)象，加熱即可恢復(fù)溶液狀態(tài)。
 
Q4：GelMA溶解后是有點(diǎn)稠的液體，能過濾么？過濾損耗大嗎？高濃度過濾會不會很費(fèi)勁�。坑袥]有其他的滅菌方式��？能121℃高溫高壓滅菌嗎？

答：可以過濾，可用0.22微米無菌過濾頭過濾除菌。過濾損耗與濃度成正比，同一型號GelMA溶液過濾，濃度越高損耗越多。常用的5% (w/v)濃度過濾損耗率＜5%，10% (w/v)濃度過濾損耗率＜10%。使用濃度≤10%（w/v）時，優(yōu)先選0.22um過濾除菌方式最實(shí)用；濃度＞10% (w/v)時，高濃度液體較粘稠不易過濾，損耗大，可選擇巴氏滅菌，或直接選購15%（w/v）的無菌GelMA溶液成品（貨號：EFL-S-GM-30/60/90）。GelMA屬于聚多肽類材料，不可以121℃高溫高壓滅菌，容易破壞分子結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致無法固化。
 
Q5：哪種型號的GelMA適合用于動物實(shí)驗(yàn)？

答：各型號都可應(yīng)用于動物實(shí)驗(yàn)，具體選用的型號和濃度要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求來選擇。需要材料緩慢降解則選用高濃度高取代度，對應(yīng)楊氏模量較高的GelMA型號，反之相反；如果是載細(xì)胞實(shí)驗(yàn)要同時考慮所需細(xì)胞效果的條件。GelMA水凝膠已被廣泛應(yīng)用于各類組織修復(fù)與再生（骨修復(fù)、軟骨修復(fù)、神經(jīng)再生、心肌修復(fù)等）、創(chuàng)面敷料、各類藥物與生長因子的負(fù)載與控釋等生物醫(yī)藥研究領(lǐng)域�？赏ㄟ^調(diào)節(jié)水凝膠的濃度和固化條件來模擬不同生物組織的機(jī)械強(qiáng)度，EFL常用型號GelMA的楊氏模量范圍參考值如下表所示。  
Q6：用GelMA負(fù)載外泌體或者ECM做細(xì)胞培養(yǎng)可以嗎？能固化嗎？有推薦的型號嗎？

答：可以的。EFL有很多客戶做相關(guān)研究，調(diào)整好添加物與GelMA的比例固化即可，具體型號要看您對強(qiáng)度的需求以及細(xì)胞的特性。GM30、GM60和GM90均有客戶使用，您可以先做預(yù)實(shí)驗(yàn)找出適合自己細(xì)胞的條件。
 
Q7：將GelMA鋪在載玻片或者培養(yǎng)皿上，固化以后明膠就會粘在基底上，有什么方法可以避免明膠粘在基底，或者盡量減少粘附力？

答：可以使用EFL的防粘膜（貨號：EFL-GRF系列），防粘膜適用于各類常用水凝膠和樹脂的無損剝離。如果您是做細(xì)胞三維培養(yǎng)可嘗試EFL的三維培養(yǎng)定制的固化環(huán)套裝(貨號：EFL-SCR-3D系列)，可改善細(xì)胞在膠內(nèi)的物質(zhì)代謝，且便于后期表征操作。
 
Q8：請問怎么從GeMA中提取細(xì)胞做WB和PCR呢？師兄說用胰酶沒用，分不下來。

答：您可使用EFL的GeMA裂解液(貨號：EFL-GM-LS-001）來降解GelMA提取細(xì)胞。GeMA裂解液可在0.5-2h內(nèi)快速降解GelMA并能較好的保持細(xì)胞的完整性和活性。提取出的細(xì)胞可以繼續(xù)傳代培養(yǎng)，也可直接進(jìn)行蛋白或RNA提取。
 
Q9：為什么我3D打印的GelMA網(wǎng)格載細(xì)胞支架有一面細(xì)胞長的好，有一面長的差呢？不是應(yīng)該整個支架都長的差不多嗎？

答：EFLers實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)表明，支架放在板孔中培養(yǎng)，貼板底側(cè)沒有上表面長的好，支架在培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)，則整個支架細(xì)胞生長無明顯差異。您可將打印好的載細(xì)胞支架置于EFL自主研發(fā)的固化環(huán)3D細(xì)胞培養(yǎng)輔具（貨號：EFL-SCR-3D系列）上培養(yǎng)，可使支架整個懸浮在培養(yǎng)基中，增強(qiáng)支架內(nèi)細(xì)胞的物質(zhì)代謝，改善您所遇到的問題。
 
Q10：為什么我同一次實(shí)驗(yàn)做出來的膠塊里面，有的膠塊細(xì)胞長的好，有的膠塊細(xì)胞長的不好啊？

答：您好！這可能與您的固化操作有關(guān)。您在固化過程中，需保持固化條件一致，光強(qiáng)、光照距離和光照時間相同。推薦您使用EFL自主研發(fā)的便攜式固化光源（貨號：EFL-LS-1601-405），該光源對比傳統(tǒng)的手電筒光源，具有光強(qiáng)穩(wěn)定，光照距離固定，光照時間可控等優(yōu)點(diǎn)，可以很好的消除樣本間制作的差異性。
   
Q12：您好，我想在打印好的支架表面包裹一層負(fù)載細(xì)胞的GelMA水凝膠，然后做免疫熒光染色，怎么才能拍出來細(xì)胞在支架上的分布呢？我的支架沒有熒光，拍不出來結(jié)構(gòu)。

答：可以選擇直接用熒光GelMA（貨號：EFL-GM-RF/GF/BF系列）包裹培養(yǎng)細(xì)胞，或者用烯類偶聯(lián)熒光染料（貨號：EFL-DYE-UF-ENE系列）給普通GelMA標(biāo)記上熒光，一起包裹培養(yǎng)細(xì)胞。選擇和您做免疫熒光顏色不沖突的熒光即可，利用GelMA發(fā)出的熒光勾勒出您打印的支架結(jié)構(gòu)即可。