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干冰保存低溫樣品造成的更快升溫和細(xì)胞活力損失的原因

瀏覽次數(shù):1194 發(fā)布日期:2024-4-15  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

為了避免變質(zhì),低溫樣品通常儲(chǔ)存在溫度約為-170°C的液氮或其氣相中。在運(yùn)輸過(guò)程中,一些科學(xué)家將這些樣本放在干冰上。然而,研究表明,將低溫樣品放在干冰上比暴露在室溫下更快地升溫。
 

罪魁禍?zhǔn)祝簩?duì)流和傳導(dǎo)。
 

基于真核細(xì)胞的治療劑等低溫樣品需要在低于水玻璃化轉(zhuǎn)變相閾值(Tg-H2O,約-135°C)的溫度下儲(chǔ)存。在這些條件下儲(chǔ)存可避免生物活性,并最大限度地減少解凍后細(xì)胞活力的損失。
 

將真核細(xì)胞溶液保存在高于Tg-H2O的溫度下會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)封裝的肝細(xì)胞球體在-80°C下儲(chǔ)存時(shí),與在-170°C下存儲(chǔ)的相同細(xì)胞相比,僅儲(chǔ)存一個(gè)月后就檢測(cè)到活細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞功能下降。

液氮(LN2)及其氣相為此類(lèi)樣品提供了一個(gè)安全的環(huán)境,將溫度保持在-170℃或更低。LN2最早由波蘭物理學(xué)家于1883年生產(chǎn),現(xiàn)在被用作許多工業(yè)環(huán)境中的冷卻劑,從計(jì)算機(jī)到相機(jī),從超導(dǎo)體到真空泵。它在任何涉及低溫樣品的研究中都是不可或缺的。

生物醫(yī)學(xué)和分子生物學(xué)研究中經(jīng)常使用的一種替代介質(zhì)是干冰,即二氧化碳的固體形式。這種材料在-78°C下升華,其用途與液氮一樣多種多樣。許多實(shí)驗(yàn)室在運(yùn)輸生物材料的過(guò)程中依靠干冰來(lái)維持寒冷的環(huán)境。然而,在干冰上運(yùn)輸生物樣品有一些令人驚訝的重要缺點(diǎn)。研究表明,干冰會(huì)導(dǎo)致儲(chǔ)存在螺旋蓋管中的樣品溶液酸化,并可能影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。

與LN2氣相運(yùn)輸相比,用干冰運(yùn)輸時(shí),懸浮在10%二甲基亞砜中的人類(lèi)淋巴細(xì)胞解凍后的存活力顯著降低。

將2ml小瓶的低溫樣品從液氮環(huán)境轉(zhuǎn)移到干冰中,并持續(xù)監(jiān)測(cè)溫度。這些樣品在放入干冰后的15到25秒內(nèi)達(dá)到并超過(guò)了水的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度。

令人驚訝的是,這比這些樣品暴露在周?chē)h(huán)境中的速度快了大約兩倍。這怎么可能呢?
 

解釋在于兩種物理現(xiàn)象:對(duì)流和傳導(dǎo)。
 

首先:干冰的二氧化碳升華產(chǎn)生了一個(gè)對(duì)流增強(qiáng)的微環(huán)境,即分子在氣體等流體中的定向運(yùn)動(dòng)。就像在對(duì)流烤箱中一樣,這種效果可以增加熱量傳遞到放置在這種環(huán)境中的任何物質(zhì)。結(jié)果是低溫樣品加速升溫至干冰溫度(-78°C)。這種升溫是實(shí)質(zhì)性的,因?yàn)楦杀冗@些樣本的LN2蒸汽儲(chǔ)存環(huán)境高約90°C。

 

其次:低溫管壁與干冰的直接接觸通過(guò)分子與低溫樣品管的直接碰撞增強(qiáng)了傳導(dǎo)熱傳遞。5因此,試圖通過(guò)在短時(shí)間內(nèi)將低溫材料放入干冰中來(lái)保護(hù)其低溫材料不受熱的研究人員實(shí)現(xiàn)了完全相反的結(jié)果:更快地升溫到Tg-H2O以上的溫度。
 

如何避免這種變暖事件?

易于理解的切勿將低溫樣品放入溫度高于-135°C的環(huán)境中。幸運(yùn)的是,存在能夠在這些溫度下運(yùn)輸?shù)蜏貥悠返慕鉀Q方案。
 

Azenta Life Sciences提供經(jīng)濟(jì)高效的CryoPod™載體,這是一種便攜式LN2蒸汽基輕質(zhì)設(shè)備,可在-150°C或更低溫度下可靠地保存樣本四個(gè)多小時(shí)。有了這個(gè)裝置,科學(xué)家們可以有效地避免寶貴的低溫樣品在處理或運(yùn)輸過(guò)程中的熱偏移。

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