20世紀末期，分子生物學技術(shù)為松材線蟲種類鑒定帶來了革命性的變革。其中，限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）、隨機擴增多態(tài)性DNA（RAPD）和序列特征化擴增區(qū)域（SCAR）等技術(shù)的應(yīng)用，極大地推動了松材線蟲鑒定技術(shù)的發(fā)展。然而，這些技術(shù)在實際應(yīng)用中也暴露出一些問題，如操作復(fù)雜、重復(fù)性差、檢測時間長等，使得它們在生產(chǎn)實踐中并未得到廣泛應(yīng)用。

為了克服這些技術(shù)難題，我國的科研人員致力于研發(fā)更為高效、簡便的松材線蟲分子檢測技術(shù)。2006年，我國自主研發(fā)出的松材線蟲分子檢測技術(shù)成功應(yīng)用于生產(chǎn)實踐，并在全國范圍內(nèi)推廣。這一技術(shù)的出現(xiàn)，極大地提高了松材線蟲檢測的準確性和效率，為我國松材線蟲病的防治工作提供了有力支持。
在此基礎(chǔ)上，南京林業(yè)大學和南京生興公司在2009年聯(lián)合研發(fā)出了松材線蟲自動化分子檢測鑒定技術(shù)。依靠該檢測技術(shù)，結(jié)合形態(tài)學方法，基本解決了松材線蟲病檢疫和監(jiān)測過程中的鑒定技術(shù)難題。



在該技術(shù)研究中，陳鳳毛等以松材線蟲的rDNA 內(nèi)部轉(zhuǎn)錄區(qū)為靶標，設(shè)計了一對實時熒光定量PCR引物和特異探針，構(gòu)建了松材線蟲實時熒光定量PCR檢測方法。而實時熒光定量PCR技術(shù)具有特異性好、靈敏度高、速度快等優(yōu)點，已發(fā)展成為分子檢測鑒定常用經(jīng)典方法，堪稱DNA檢測的金標準。（※金標準：就醫(yī)療檢測方面，國內(nèi)外關(guān)于QPCR檢測的應(yīng)用研究上千項，環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)（LAMP）僅幾項，重組酶聚合酶擴增技術(shù)（RPA）和變性泡介導(dǎo)的鏈交換擴增技術(shù)（SEA）沒有相關(guān)注冊，所以實時熒光定量PCR技術(shù)依舊是DNA檢測的金標準。）



該方法中，特異引物組合 F11 /Ｒ11 與探針 TaqMan－11 能夠較好地區(qū)分來自枯死松樹體內(nèi)的松材線蟲、擬松材線蟲、大核滑刃線蟲、霍夫曼尼傘滑刃線蟲和長尾屬 Seinura 線蟲。且在10 μL 反應(yīng)體系中能夠檢測出0. 005 pg的 DNA 含量。

松材線蟲自動化分子檢測鑒定技術(shù)不僅具有高度的準確性和靈敏度，而且操作簡便、重復(fù)性好、檢測時間短。這使得該技術(shù)在實際應(yīng)用中具有很大的優(yōu)勢，尤其是在大規(guī)模松材線蟲病檢疫和監(jiān)測工作中，可以大大提高工作效率和準確性。



該技術(shù)將分子生物學技術(shù)與自動化設(shè)備相結(jié)合，實現(xiàn)了松材線蟲病分子檢測技術(shù)的廣泛普及。通過該技術(shù)，可以快速、準確地鑒定松材線蟲的種類和數(shù)量，為松材線蟲病的檢疫和監(jiān)測提供了有力保障。

參考文獻：

• 李敏,葉建仁,陳鳳毛.松材線蟲檢測技術(shù)研究進展[J].中國森林病蟲,2022,41(03):52-58. DOI:10.19688/j.cnki.issn1671-0886.20220043.
• GB/T 35342-2017松材線蟲分子檢測鑒定技術(shù)規(guī)程