活細胞成像設備用于細胞遷移研究
瀏覽次數(shù):656 發(fā)布日期:2024-3-14
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劃痕實驗又稱傷口愈合實驗,是一項常見的細胞功能實驗,用于檢測細胞的遷移能力。原理是當單層細胞生長到融合狀態(tài)時,在融合單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域(即劃痕),之后隨著培養(yǎng)時間的延長劃痕會逐漸愈合,同時細胞增殖也參與了這一過程。
劃痕實驗在一定程度上模擬了體內細胞遷移的過程,并可根據(jù)需要對遷移過程中的活細胞進行成像,分析細胞間相互作用,而且劃痕實驗也是研究細胞遷移的體外實驗中最簡單的方法
[1]。因此,我們可以通過劃痕實驗來進行藥物篩選、化合物毒性、癌癥治療等研究。
劃痕實驗的基本流程是“培養(yǎng)細胞→制造劃痕→拍攝遷移圖像→分析數(shù)據(jù)”。
圖1 細胞劃痕實驗流程圖
Celloger
® Mini Plus是一款活細胞成像設備,可以根據(jù)用戶設定的時間參數(shù)對指定的位置進行成像記錄。 同時可通過使用分析軟件計算捕獲圖像的細胞融合度(%),定量分析細胞的遷移能力。常規(guī)細胞劃痕工作的全流程,從細胞培養(yǎng)到完成細胞實驗,均可以用該系統(tǒng)來完成觀察記錄(圖2)。
圖2 Celloger® Mini Plus設備
應用示例:
1、使用Celloger
® Mini Plus在4x物鏡下,記錄明場HeLa、L929、U-2OS、CHO-k細胞的遷移情況,間隔拍攝時間為30分鐘,總記錄時長為3天(圖3)。
圖3 HeLa、L929、U-2OS、CHO-k細胞的遷移情況(比例尺,200μm)
2、為了驗證來自E2結合的CAFs的CD147是否單獨增強了癌細胞的遷移,在實驗中使用Celloger® Mini Plus記錄48小時MKN1細胞的遷移情況,結果顯示,si- ERα對caf# 14的處理顯著降低了MKN1癌細胞的遷移,但通過添加rhCD147可以恢復癌細胞遷移能力
[2](圖4)。
圖4 細胞的遷移情況(比例尺,200μm)
結語:
評價劃痕實驗的常規(guī)方法通常為定點分析,研究者需在固定的時間(24/48/72h)將樣本拿出培養(yǎng)箱置于顯微鏡下觀察。使用Celloge
®活細胞成像設備無需反復拿取細胞樣本,在培養(yǎng)箱內即可實現(xiàn)對細胞的可視化以及進行長期動力學測定。利用延時成像技術,可以通過圖像和視頻來驗證細胞的遷移能力,豐富研究人員的數(shù)據(jù)以及確保數(shù)據(jù)的客觀準確性。
參考文獻:
[1] Liang CC, Park AY, Guan JL. In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro. Nat Protoc. 2007;2(2):329-33.
[2] Bae WJ, Kim S, Ahn JM, Han JH, Lee D. Estrogen-responsive cancer-associated fibroblasts promote invasive property of
gastric cancer in a paracrine manner via CD147 production. FASEB J. 2022 Nov;36(11):e22597.