一、概述

細(xì)胞尺寸在生物研究中至關(guān)重要。越來越多研究揭示了細(xì)胞大小和表型特征（如干性特征、增殖能力和代謝狀態(tài)）之間復(fù)雜的相關(guān)性。在生物制造等應(yīng)用的工藝流程中，細(xì)胞大小是評估細(xì)胞治療中分批培養(yǎng)或原材料細(xì)胞是否健康的關(guān)鍵指標(biāo)。因此，自動細(xì)胞計數(shù)中可靠的細(xì)胞大小測定已成為重要的結(jié)果。

點成LUNA-FX7細(xì)胞計數(shù)儀可精確提供細(xì)胞大小的數(shù)據(jù)。除了所有點成LUNA系列細(xì)胞計數(shù)儀共有的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞尺寸門控功能外，點成LUNA-FX7計數(shù)輸出還包括與每個細(xì)胞活力狀態(tài)結(jié)合的尺寸測定。此外，點成LUNA-FX7具有多種方法來根據(jù)計數(shù)期間和計數(shù)后的大小對細(xì)胞群進(jìn)行分析和分類。在此，我們展示了點成LUNA-FX7在測量細(xì)胞尺寸上的準(zhǔn)確性和可靠性及其精確的尺寸門控功能。為了評估確定細(xì)胞大小的準(zhǔn)確性，在明場總細(xì)胞計數(shù)模式下對六種不同的NIST可追蹤粒度標(biāo)準(zhǔn)品和兩種細(xì)胞系A(chǔ)sPC-1(胰腺癌)和DLD-1(結(jié)腸癌)進(jìn)行了計數(shù)。

二、實驗過程

1、精確測量各種粒徑

六種不同的NIST可追蹤粒徑標(biāo)準(zhǔn)品(10-46 μm)在點成LUNA-FX7的明場總細(xì)胞計數(shù)模式下進(jìn)行計數(shù)。測定粒徑的準(zhǔn)確度為96.7%以上。相反，市面上大多細(xì)胞計數(shù)儀對于10 μm或更小和50 μm及更大的顆粒則不準(zhǔn)確。

NIST可追蹤粒度標(biāo)準(zhǔn)的尺寸測定。

(A-F)圖像顯示了標(biāo)記良好的顆粒，表明顆粒直徑尺寸的精確測量。

(G)該表顯示了LUNA-FX7™和競爭對手計數(shù)器的測量顆粒尺寸和尺寸測量精度。

2、混合條件下目標(biāo)尺寸顆粒的計數(shù)

為了評估點成LUNA-FX7中尺寸測量的精確性，我們準(zhǔn)備了四種不同比例的NIST可追蹤粒徑標(biāo)準(zhǔn)品（~10 μm、20 μm、40 μm和60 μm）的混合物。最初，我們對最小細(xì)胞尺寸值為3 μm和最大細(xì)胞尺寸值為60 μm的混合顆粒進(jìn)行計數(shù)，該值是根據(jù)默認(rèn)協(xié)議進(jìn)行修改的。計數(shù)后，生成細(xì)胞濃度與細(xì)胞大小的直方圖，并且NIST標(biāo)準(zhǔn)已正確分類。

精確的尺寸測定。

(A) 圖像顯示了標(biāo)記良好的各種尺寸的顆粒。

(B-C)直方圖指示NIST顆粒按尺寸的準(zhǔn)確分布。

執(zhí)行選定的尺寸門控，生成適合目標(biāo)尺寸的完美標(biāo)簽，尺寸測量的準(zhǔn)確度超過96.2%。此外，尺寸門控可以輕松應(yīng)用于點成LUNA-FX7，通過計數(shù)前預(yù)設(shè)的協(xié)議，通過計數(shù)后立即調(diào)整直方圖，或利用具有不同大小參數(shù)的協(xié)議重新分析存儲的計數(shù)數(shù)據(jù)。

LUNA-FX7™中特定尺寸的門控。

標(biāo)記的圖像和直方圖顯示，目標(biāo)尺寸的顆粒（以橙色表示）通過門控進(jìn)行了集中、選擇性和排他性的檢測。

3、細(xì)胞系的計數(shù)和尺寸門控應(yīng)用

最后，我們計數(shù)了兩種不同大小范圍的細(xì)胞系：AsPC-1（胰腺癌）和DLD-1（結(jié)腸癌）。健康的AsPC-1 細(xì)胞的尺寸范圍為8 - 40 µm，而健康的DLD-1細(xì)胞的尺寸范圍預(yù)計較窄，為10 - 20 µm。LUNA-FX7™ 準(zhǔn)確捕獲兩個種群的整個大小范圍。

AsPC-1和DLD-1細(xì)胞的細(xì)胞計數(shù)和大小測定。

應(yīng)用AsPC-1 (A-C)和DLD-1 (D-F)細(xì)胞系來確認(rèn)不同尺寸混合的計數(shù)性能。

4、結(jié)論

點成LUNA-FX7™有多種方法來測量、區(qū)分和確定細(xì)胞群的大小。點成LUNA-FX7™具有計數(shù)期間和計數(shù)后預(yù)定義大小門控選項，可靈活評估細(xì)胞群的健康狀況和質(zhì)量。此外，點成LUNA-FX7™的再分析功能可以對下游分析中保存的珍貴計數(shù)進(jìn)行更廣泛的評估。