脂多糖LPS的穩(wěn)定性介紹和化學(xué)分解作用
瀏覽次數(shù):984 發(fā)布日期:2024-1-10
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(一)熱穩(wěn)定性
LPS(lipopolysaccharide,脂多糖)中性溶液在室溫放置數(shù)月,其生物學(xué)活性不發(fā)生明顯的改變,在4℃或低溫冰箱中,其生物學(xué)活性可保持?jǐn)?shù)年至數(shù)十年。冷凍干燥的LPS中性粉劑,在室溫或冰箱條件下可放置幾十年或更長時間而不失去其生物學(xué)活性。
細(xì)菌LPS具有很強(qiáng)的耐熱性,一般的高壓滅菌不能使其滅活,115℃ 30 min的濕熱僅能破壞25%左右的內(nèi)毒素活性。內(nèi)毒素在50%相對濕度下可被環(huán)氧乙烷去除活性。當(dāng)LPS的水溶液在不同溫度下處理時,發(fā)現(xiàn)在200℃ 1h仍能檢測出內(nèi)毒素活性,而進(jìn)一步加熱到250℃ 30~45min,或180℃ 3~4h則活性完全消失。我國2000年版藥典內(nèi)毒素檢查法規(guī)定,玻璃器皿的熱原處理為250℃干烤1h以上。
(二)酸堿穩(wěn)定性
室溫條件下LPS在酸性溶液中可發(fā)生部分降解,這主要由核心多糖與Lipid A間糖苷鍵的裂解引起,在加熱的條件下這一反應(yīng)可加速。在0.1N醋酸中,100℃, 45min可使LPS失去90%的生物活性。在加熱條件下﹐強(qiáng)酸溶液可使LPS分子徹底破壞。50%的枸櫞酸(pH 1.0)可水解 Lipid A 的磷酸基團(tuán)或羥基脂肪酸等活性基團(tuán)。堿性因素主要導(dǎo)致Lipid A骨架上連接的磷酸酯鍵及脂肪酸酯鍵水解,使Lipid A 結(jié)構(gòu)受到破壞,從而導(dǎo)致LPS分子失去活性。故LPS宜在中性﹑低溫的條件下保存。
(三)輻照對LPS的影響
長時間(48h)、大劑量的Co60照射后,LPS的結(jié)構(gòu)可以被完全破壞。如有條件,對不能用干烤處理的實(shí)驗(yàn)器具,可用長時間,大劑量的輻照清除LPS。
(四)氧化劑對LPS活性的影響
過氧化氫是一種強(qiáng)氧化劑,具有防腐、滅菌、除臭及清潔等作用。它分解后能釋放大量新生態(tài)氧,可氧化分解LPS。過氧化氫主要裂解LPS中Lipid A還原端C1位的磷酸基團(tuán)。產(chǎn)生的單磷酸LPS,使其毒性下降,實(shí)驗(yàn)證明,單磷酸的Lipid A毒性明顯弱于野生型的Lipid A,這與過氧化氫降解LPS后毒性下降結(jié)果相符。
用鱟試劑檢測常用氧化消毒劑對大腸桿菌內(nèi)毒素的滅活作用,結(jié)果顯示,氯石灰溶液(含5000mg/L有效氯)在20℃作用30min、氯胺T溶液(含5000mg/L有效氯)在20℃作用70min可滅活95%以上的LPS活性。在60℃加熱條件下,氯胺T滅活同量內(nèi)毒素僅需40min,0.2%酸性高錳酸鉀作用2min、1.0%中性高錳酸鉀作用160min可滅活95%以上的LPS。